蛋白质高级结构性质及分离纯化.pptxVIP

研究蛋白质构象的方法X射线衍射法紫外差光谱荧光和荧光偏振圆二色性法核磁共振X射线衍射法入射的x射线投射到被检物体上引起光波的散射，散射光含有物体构造的全部信息，用透镜收集和重组散射光波产生物体的放大图像。核磁共振（NMR） 核磁共振的方法与技术作为分析物质的手段 ，由于其可深入物质内部而不破坏样品 ，并具有迅速、准确、分辨率高等优点而得以迅速发展和广泛应用 ，已经从物理学渗透到化学、生物、地质、医疗以及材料等学科 ，在科研和生产中发挥了巨大作用 。核磁共振是1946年由美国斯坦福大学布洛赫(F.Block)和哈佛大学珀赛尔(E.M.Purcell)各自独立发现的，两人因此获得1952年诺贝尔物理学奖。50多年来，核磁共振已形成为一门有完整理论的新学科。核磁共振基本原理核磁共振原理实现核磁共振的两种方法检测共振信号的方法傅里叶(Fourier)变换核磁共振原理半数以上的原子核具有自旋，旋转时产生一小磁场。当加一外磁场，这些原子核的能级将分裂，既塞曼效应。 在外磁场B0中塞曼分裂图：共振条件：? = ?0 = ??0 实现核磁共振的两种方法a．扫场法: 改变?0b．扫频法: 改变?核磁共振新技术 核磁双共振 二维核磁共振 NMR成像技术 魔角旋转技术 极化转移技术 NMR成像技术投影重建成像方法Fourier成像方法弛豫时间成像方法逐点扫描方法线扫描方法切片扫描方法高分率成像和快速成像法稳定蛋白质三维结构的作用力蛋白质分子中的非共价键：（1）氢键： 羧基上的氧与亚氨基上的氢原子所形成。 作用：链内维持二级结构；链间为三、四级结构所需。（2）疏水键：aa非极性侧链形成。 作用：维持三级结构。（3）盐键：带正负电荷的侧链通过静电引力形成。（4）范德华力：中性分子或原子间的作用力。次级键的特点与作用键能弱；数量多。所以，在维持蛋白质空间结构中起重要作用。维系蛋白质分子的一级结构：肽键、二硫键维系蛋白质分子的二级结构：氢键维系蛋白质分子的三级结构：疏水相互作用力、氢键、范德华力、盐键维系蛋白质分子的四级结构：范德华力、盐键 a盐键（离子键 ）b氢键c疏水相互作用力 d 范德华力e二硫键f 酯键氢键、范德华力、疏水相互作用力、盐键，均为次级键氢键、范德华力虽然键能小，但数量大疏水相互作用力对维持三级结构特别重要盐键数量小二硫键对稳定蛋白质构象很重要，二硫键越多，蛋白质分子构象越稳定离子键氢键疏水相互作用力范德华力酰胺平面与二面角蛋白质的二级结构指蛋白质多肽链本身的折叠和盘绕形式；蛋白质分子中邻近的氨基酸之间由于氢键的作用盘旋折叠形成的立体空间结构。包括：α- 螺旋结构β- 折叠结构β- 转角结构自由回转维持蛋白质二级结构的主要作用力是氢键（1） α- 螺旋(α-helix) 因肽链中aa残基中的-NH与前三个aa的C=O间可形成氢键，使得肽链呈螺旋状盘曲。氢键取向几乎与中心轴平行。①多肽链中的各个肽平面围绕同一轴旋转，形成螺旋结构，螺旋一周，沿轴上升的距离即螺距为0.54nm,含3.6个氨基酸残基；两个氨基酸之间的距离0.15nm.②肽链内形成氢键，氢键的取向几乎与轴平行。第一个氨基酸残基的酰胺基团的-CO基与第四个氨基酸残基酰胺基团的-NH基形成氢键。③蛋白质分子大多为右手?-螺旋。④亲水基团位于螺旋的外侧，疏水基团位于螺旋的 内侧。左手和右手螺旋影响α- 螺旋稳定的因素蛋白质的氨基酸组成是主要的影响因素： Pro 同种电荷（2） β-折叠(β-pleated sheet) 结构特点： 肽链伸展，按层排列, 在肽链的不同区段或不同肽链间形成氢键,维持结构的稳定性。 ?-折叠 ?-折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。肽链的主链呈锯齿桩折叠构象。①在?-折叠中，?-碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的R基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为0.35nm.② ?-折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。③?-折叠有两种类型。一种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。β-折叠有两种类型平行：所有肽链的N端处于同一端，氢键不与肽链走向垂直。如： β- 角蛋白。反平行：肽链的N端不处于同一端，氢键与肽链走向垂直。如：丝心蛋白。反平行式平行式（3）β- 转角(β- turn)链内形成氢键，多肽链出现180°的回折。此回折角称β- 转角结构。 此结构广泛存在球状蛋白中。β- 转角（4）自由回转(random coil)亦称无规则卷曲、自由绕曲指无规律的松散肽链结构。通常酶蛋白的功能部位在此。超二级结构(supersecondary structures