高效液相色谱.pptVIP

第20章 高效液相色谱法 High Performance liquid Chromatography (HPLC);20.1 概述;一、HPLC与GC差别;GC：流动相为惰性气体 流动相与组分无亲合作用力，仅起运载作用；组分只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性;二、HPLC的特点;20.2 HPLC的分类和基本原理;20.2.2 基本原理;采用小粒度、窄分布的球形固定相，均匀装柱。A↓ 采用低黏度流动相，低流速。C ↓ ，u ↓ 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。一般恒温操作。;20.3 各类高效液相色谱法;20.3.3 化学键合相色谱法; 适用：非极性~中等极性组分 应用最广，可解决80%的HPLC问题;2. 正相键合相色谱法;正相色谱;B + H+ ? BH+;（2）常用离子对试剂 ;4. 离子抑制色谱（ISC） ;7种四环素类抗生素对照品;20.4 固定相（stationary phase）; 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； 一般的键合相用硅胶为载体： a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C (ODS）（P527） ;（1） 载体性质;时间，min; 常见的有醚基和二羟基键合相。 此类固定相应用较少。;流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。 流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况。;流动相类别;3. 流动相选择;选择流动相时应注意的几个问题;20.6 高效液相色谱仪;输液系统;1. 柱塞往复泵 无脉动 流量恒定 能自由调节流量 耐高压 耐腐蚀等特性;2. 梯度洗脱装置;20.6.2 进样器与色谱柱;2. 色谱柱;20.6.3 液相色谱检测器;紫外检测器的弱点;（3） 光电二极管阵列检测器（DAD）;高效液相色谱;光电二极管阵列检测器;2. 荧光检测器（FD）;18.8 HPLC的应用;2. 稠环芳烃的分析