免疫组化真题.pdf

免疫组织化学考题 2004 级考题 1.简述原位杂交组织化学的基本原理。 P84 2.简述免疫组化染色 ABC 法的基本原理。 P52 3.组织块进行固定的原理是什么 ?常用的固定方法和固定剂有哪些 ?P10 4.何为细胞培养术 ?举例说明其在生物学医学研究中的应用 . 5.细胞凋亡的形态学检测方法有哪些 ? 6.何为色温 ?在显微摄影中常用日光型胶片在灯光下拍照 ,您将用何种方法调节色温 ?P184 7.何为像素？在数码摄影中常考虑的参数是什么？ P136;P198 8.酶标抗体免疫细胞化学间接法的基本原理是什么？此法的优缺点是什么？按此方法选择 抗体时应注意什么问题？ P51 9.结合本专业的研究方向，自行设计一个双重免疫荧光细胞化学染色的实验，并写出实验流 程，简述免疫荧光细胞化学染色中的注意事项。 10.学过此门课程后有何感想？为使此课程开设的更好，请留下您宝贵的意见和建议。 2007 级考题 1.简述形态学研究有哪些主要常用技术？这些技术能解决哪些问题？ 2.试述石蜡切片和 HE 染色的基本制备过程，并指出制备免疫组化的石蜡切片和用于 HE 染 色的石蜡切片有何不同。 P11;P207;P208 3.上课留的作业 4.何谓免疫荧光染色，用何种方法消除非特异荧光？ P44;P74 5.ANN VASSAY 检测细胞凋亡的原理、试验流程和结果分析。 答：原理： 主要是根据细胞凋亡过程中的形态特征改变， 细胞膜的改变是这些特征中较早出 现的一种。在凋亡细胞中，细胞膜磷脂酰丝氨酸（ PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外 侧。Annexin-V 是一种 35-36KD 的钙离子依赖的磷脂结合蛋白， 它对 PS 具有较高的亲和力。 细胞凋亡时，可以和外翻的 PS 结合，从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜 上的 PS 也外翻，因而也会阳性。因此，还会加一种 DNA 染料，常用的有 P1。由于死亡的 细胞膜通透性增高，染料可以进入细胞内和 DNA 结合，从而可以发荧光，区分出死细胞。 试验流程： 1）细胞收集：悬浮细胞直接收集 10ml 的离心管中，而贴壁细胞先用滴管轻轻 吹打。凋亡细胞一经吹打可能脱壁， 收集到 10ml 的离心管中， 没脱壁的细胞用 0.02% 的 EDTA 消化使之脱壁，每样本细胞数为（ 1-5）× 106，500~1000r/min 离心 5min 弃去培养液。 2 ） 用孵育缓冲液洗 1 次， 500~1000r/min 离心 5min 。3）用 100 μl 的标记溶液重悬细胞，室温 下避光孵育 10~15min 。4 ）500~1000r/min 离心 5min 沉淀细胞，孵育缓冲液洗 1 次。 5）加 入荧光溶液 4℃下孵育 20min ，避光并不时振动，上机检测。 6 ）流式细胞仪分析：流式细 胞仪激发光波长用 488nm ，用一波长为 515nm 透带滤器检测 FTTC 荧光，另一波长大于 560nm 的滤器检测 P1 。 结果分析：凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如 P1 有抗染性，坏 死细胞则不能。细胞膜有损伤的细胞的 DNA 可被 P1 着染产生红色荧光，而细胞膜保持完 好的细胞则不会有红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期 P1 不会着染而没有红色荧光信 号，正常活细胞与此相似。 6.何谓像素？简述数码相机摄影的基本原理。 P198 7.影响曝光的