第二次分子生物学研究方法.pptVIP

5.3 基因克隆技术; 以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程;具体流程;（一）目的基因的获取;* 化学合成法获取目的基因;（一）目的基因的获取;组织或细胞染色体DNA;;（一）目的基因的获取;cDNA文库的构建;定 义： （cDNA Library） 某种生物基因组转录的全部mRNA经反转录产生的cDNA片段分别与克隆载体重组，储存于某种受体菌中，该群体就称该生物基因组的cDNA文库。 原 理： 将带poly(A)的mRNA经酶促反应转变为双链DNA，再与原核载体连接。 ;mRNA ;一、制备用于克隆cDNA的mRNA;二、cDNA第一链的合成;２、随机引物引导的cDNA合成法 见书图P174 　　根据许多可能的序列，合成出6-10个核苷酸长的寡核苷酸短片段（混合物），作为合成第一链cDNA的引物。在应用这种混合引物的情况下，cDNA的合成可以从mRNA模板的许多位点同时发生，而不仅仅从3’-末端的oligo(dT)引物一处开始。;三、cDNA第二链的合成;三、cDNA第二链的合成;2、置换合成法;;四、双链cDNA分子与载体进行连接; cDNA文库的构建;RACE技术（rapid amplification of cDNA ends）是一项在已知cDNA序列的基础上克隆5′端或3′