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中央广播电视大学社会实践报告 组织培养 中央广播电视大学社会实践报告 组织培养 关于植物组织培养的实习报告 植物的组织培养是以植物生理学为基础，近几十年发展起来的一项无性繁殖的新技术。广义上又叫离体培养，指将植物的离体器官、组织、细胞以及去除细胞壁的原生质体，通过无菌操作，在人工控制环境下，培养在人工配制的培养基上对其进行克隆，使其生长、分化并成长为完整植株的过程。 本人于201*年11月17日至201*年1月20日在北京太阳宫园林绿化有限公司牛栏山基地自行实习。我的实习内容主要包括MS培养基的制备，萱草、玉簪的增殖培养，草莓茎尖的诱导。具体实践过程如下： 一、MS培养基的制备 1.浓缩贮备液需配制一系列的浓缩贮备液为Ⅰ大量元素（浓缩20x）、Ⅱ微量元素（浓缩1000x）、Ⅲ铁盐（浓缩100x）、Ⅳ除蔗糖之外的有机物质（浓缩1000x）。所有的贮备液都应贮存于塑料瓶中或玻璃瓶中，置冰箱中保存，其中铁盐贮备液必须贮存于琥珀色玻璃瓶中。 2.制备1LMS空白培养基先量取贮备液Ⅰ50ml、贮备液Ⅱ1ml、贮备液Ⅲ10ml、贮备液Ⅳ1ml至量筒中加适量蒸馏水定容至1L，并倒入容器中加热；然后称取蔗糖30g/L，琼脂4.5g/L搅拌至完全溶解；再用NaOH和HCl调至pH值为5.8，分装至玻璃瓶中（30ml/瓶），最后放入高压锅中灭菌，在压力为108kPa、温度121℃下灭菌20min即可。 二、萱草的增殖培养 将增殖培养出的丛生芽与愈伤组织一起，分割转接到MS+BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L的培养基上进行培养。培养室温度为25±2℃，光照强度约1200~1500LX，光照时间为10小时。经过20~30天芽与愈伤的不断增殖生长，即可分化出丛生芽。每隔30~45天，将分化的丛生芽切成2~3株再接种在增殖培养基上，每次可扩大5倍。 三、玉簪的增殖培养 将增殖分化出的丛生芽接种到MS+BA2.0mg/L+KT2.0mg/L+NAA0.05mg/L培养基上进行增殖培养，培养室温度为25±2℃，光照强度约1500~201*LX，光照时间为12小时。每隔30~45天将分化出丛生芽切成单株再接种到增殖培养基上，每次可扩大4~5倍（淘汰增殖少而慢的材料）。增殖繁殖代数绿叶品种控制在24代以内，花叶品种控制在16代以内。 四、草莓茎尖的诱导 （一）外植体的选择与消毒 1.外植体的选择草莓的组织培养以茎尖作为外植体效果较好，常用于草莓快繁脱毒技术。摘取基地中草莓红颜品种新抽出的健壮无病的匍匐茎4～5cm长作为外植体材料，进行丛生芽的诱导。 2.外植体的消毒用自来水冲洗一小时，洗刷表面污物及绒毛，然后加入84消毒液与洗涤灵清洗10min，同时利用离心力转圈摇动瓶子使外植体表面的污染物被析出，最后用自来水冲洗数次，直到没沫为止将水倒掉。移置于超净工作台上，将冲洗后材料再截成2～3cm长，用75%酒精浸泡15~20s，用无菌水冲洗1次，然后用0．1％的升汞(HgCl2)溶液浸泡杀菌5~10min，再用无菌水冲洗5~6次，少量多次，最后用无菌滤纸吸去外植体表面的水分，待接种。 （二）接种与培养 1.接种在无菌条件下，将已经过消毒的匍匐茎外植体，用解剖刀剥取其微茎尖，接种到MS基本培养基中。刚接种的外植体需进行暗培养（3天）或是保持较低温度等措施，均可减轻材料褐化的发生；增加光照或延长光照时间都可降低材料玻璃化的产生。 2.培养建立无菌体系得到无菌苗后，接种到MS+BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L芽诱导培养基上培养，培养室温度为25±2℃，光照强度约201*~3000LX，光照时间为12小时。20d左右无菌苗增厚，切口有瘤状突起，即愈伤组织，继续培养即可由它分化出不定芽。将不定芽与愈伤组织一起，分割转接到MS+BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L增殖培养基上培养，经过15~20天芽与愈伤的不断增殖生长，即可分化出丛生芽。每隔20~30天将分化的丛生芽转接至增殖培养基上，每次可扩大8~10倍。 五、实习中发现的问题 我是从201*年6月份开始深层次接触植物组织培养这个行业的，在学校时虽然学习过组培的相关知识，但只是理论知识，实际操作方面接触并不多。这次的实习刚好是我在逐步熟悉组培这个行业的过程中进行的，使我更加深刻的发现了自身存在的一些问题，具体如下： 1.增强专业知识，学以致用初入组培这个行业，经验不足，书本上的理论知识仍需与实际相结合。在专业知识上与自己本职工作需求还存在着一定的差距，需要不断增强自己的专业性知识，学以致用，并以书中所写为依据，根据实际情况适时变通。 2.熟练操作技术，提高速度初接触时，由于操作技术不熟练，导致组培材料大量被污染，损失严重。因此在操作过程中越规范材料被污染的可能性就越小，再在此基础上提高速度，适应工厂化生产。