液相色谱实验报告.docxVIP

华南师范大学实验报告 液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯 一、 实验目的 1、 掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法； 2、 了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。 二、 实验原理 高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液 器屮的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内， 由于样品溶液屮的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的 吸附一解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流 出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 三、 主要仪器和试剂 主要仪器：岛津液相色谱仪 (LC?10AT)［配有紫外检测器， PhenomenexODS 柱］; 10 UL微量注射器 试剂：苯标准溶液：10.0 uLVmL； 甲苯标准溶液：10 .0 uL/mL； 苯、甲苯混合标准溶液： 10.0 u L7mL ； 甲醇：80% ； 苯和甲苯混合待测溶液； 四、 实验步骤 1、 标准溶液的配制系列 用100 UL的微量注射器分别量取1011 L 20 UL、50 uL、100 UL的苯和甲苯的混合标 准溶液(10.0 uLVmL),再分别加入90 UL、80 UL、50 uL、0 uL甲醇将其稀释，作为待测 液，其浓度分别为 luLVmL、2 uLVmL、5 u L7mL、10 u L7mL 2、 色谱条件优化 按操作规程开机，并调好色谱条件，使仪器处于工作状态。控制流动相流速为甲醇： 0.8mL7min 水：0.2 mLVmin ；柱温30C；检测波长 254nm ；观察记录保留时间，通过软 件分析两峰分离效果。 改变色谱条件，控制流动相流速为甲醇：0.95mL7min、水：0.05 mLVmin ；柱温30 °C；检 测波长254nm :观察记录保留时间，通过软件分析两峰分离效果。 通过观察两种色谱条件下的峰分离效果，选择最佳的色谱条件。若还不能达到最佳的 分离效果，可以再设定不同的色谱条件，然后根据峰分离效果，选择最佳的色谱条件。 3、苯、甲苯定性分析 在最佳条件下，待基线走稳后，用10 UL微量注射器分别进样5 UL苯和甲苯混合待测溶液， 5 UL苯标准溶液(10 .0 uLVmL)和5 UL甲苯标准溶液(10 .0 UlVmL)(微量注射器用甲醇润洗 3?5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。 4、苯、甲苯定量分析 最佳条件下，待基线走稳后，用 10 UL微量注射器分别进样 1.0 n L/mL、2.0 u L7mL、 4.0 u LVmL、10.0 n L7mL的苯和甲苯混合标准溶液5 uL。观察并记录各色谱图上的保留时 间和峰面积。绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线。 5、苯和甲苯混合待测溶液分析 最佳条件下，待基线走稳后，用1° U L微量注射器进样苯和甲苯混合待测液 5 nL,观 察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积 。根据峰面积在工作曲线上查岀苯和甲苯待测液的 浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。 五、实验数据及分析 高效液相色谱数据报告 一、色谱条件优化 二、定性分析  样品 苯 甲苯 保留时间 3.765 4.917 三、定量分析 苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为： 1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml。 甲苯 浓度 峰面积 浓度 峰面积 1 ul/ml 2 ul/ml 5 ul/ml 10 ul/ml Y=aX+b 212685 429291 954537 1905343 1 ul/ml 2 ul/ml 5 ul/ml 10 ul/ml Y 二 aX+b 387710 747983 1533892 2928373 a = 278490.9 a = 278490.9 b = 146280.5 a = 186510.8 b = 36165.15 RA2 = 0.9995768 R = 0.9997884 RA2 = 0.9991048 R = 0.9995523 四、未知样品浓度 未知稈晶 苯 甲苯 浓度2 2.7ul/ml 3.6ul/ml 浓度1 2.9 ul/ml 3.6ul/ml 实验讨论 由于实验屮待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单，只要在实验过程 屮，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果，因而 采用标准曲线法。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于 实验操作及计算均较为复杂，实验及数据处理的时间长，效率相对不高，故实验中采用标准曲线 法作为定量的方法。 最佳色谱条件的选择是本实验准确度的关键。若苯与甲苯的峰分离效果过小，苯与 甲苯