(版)HepG2细胞培养条件.docxVIP

精品文档 精品文档 PAGE 精品文档 1. 复苏温度的选择:快速将所冻存细胞 40℃水浴摇床60转/min慢摇至其溶解，溶解后马 上转入37℃水浴箱，手工慢摇恒温 2～3min复苏,复苏后800 转/min 离心5min, 吸去上清加入10ml含15%胎牛血清 DMEM培养基,混匀后加入细胞培养板 ,每孔1 ml，5%CO2温箱37℃培养. 2. 复苏培养基的选择:用DMEM培养基培养的细胞结果在接种密度为 1×104/cm2、血清含 量为15%时，经6h培养后细胞开始贴壁，12h后大部分细胞贴壁，且增值速度最快，4d 后可以按1:3的比例传代。 复苏的接种密度:最佳接种密度为1×104/cm2. 消化酶以及消化时间的选择:先用pH7.2的PBS洗涤三遍后，再用0.25%的胰蛋白酶溶液消化0.5分钟效果比较好. 培养基中血清浓度的选择:10%--20%.最好.15%就差不多. 双抗浓度的选择:双抗浓度为0.5%时传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长. 培养基pH条件的选择:pH7.2,4.5%CO2时传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长 细胞传代条件的选择:推荐在汇合度在95%-100%时进行. 细胞冻存:甘油和DMSO是两种常用的细胞保护剂.他们在细胞保存液中起到防止细胞内冰晶形成的目的.血清浓度经常可以增加到20%. 细胞复苏:冻存细胞应在流水中快速融化并加入