微生物的实验室培养复习.pptxVIP

课题1 微生物的实验室培养 ;2.基本成分：;营养物质;营养物质;划分标准;划分标准;加入青霉素(是抗生素，杀细菌)的培养基: 不加氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: ;1.无菌范围：;耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时;四、大肠杆菌的纯化培养;㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基;倒平板;1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。;4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。;学生看课P18平板划线法的操作;㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基;;平板划线时不能划破培养基，为什么？;问题讨论;;问题讨论;6支试管，分别加入9ml无菌水;⑵稀释涂布平板法：;;问题讨论;⑴平板划线法：;下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( ) A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前;五、课题成果评价 ;1.临时保藏：;;编号;（3）若除去成分② （NH4)2SO4 ，加（CH2O），该培养基可用于培养 。 （5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行是 。 （6）右表中各成分重量确定的原则是 。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。;课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;一、课题背景;尿素是培养基中的唯一氮源， 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源，才能生长。 缺乏???酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。;1、显微镜直接计数：;2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。;注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。(即设置重复组求平均数) ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。;（一）土壤取样;（六）鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基：加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存 1、酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 2、伊红—美蓝培养基：鉴定大肠杆菌 原理：代谢产物与伊红—美蓝结合→ 菌落呈黑色并带有金属光泽。;;栏目链接;分解纤维素的微生物的分离;2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。;(三)、实验设计;【资料三】刚果红染色法;染色法;比较项目;比较 项目;可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌;四、大肠杆菌的纯化培养;㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基;平板划线时不能划破培养基，为什么？;6支试管，分别加入9ml无菌水;;下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( ) A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前;注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。(即设置重复组求平均数) ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。;栏目链接