热激蛋白基因克隆.pptVIP

2 研究现状 研究发现，许多细胞的耐热能力取决于细胞内热激蛋白70（HSP70）的合成，HSP70具有热保护作用。目前，人们对植物和动物体内热激蛋白已有较深刻的认识，而关于微生物热激蛋白却鲜有报道，关于荷叶离褶伞的热激蛋白尚未见报道。本研究采用RT-PCR技术克隆荷叶离褶伞HSP70全长基因，构建HSP70全长基因的gpd启动子驱动的真菌表达载体。 第二部分 实验条件 已通过响应面法优化了荷叶离褶伞的DNA提取，获得了高质量的DNA。 在实验室已培育出高产菌株，实验中用到的菌株、载体由梁倩倩老师保存，分子生物学实验室的实验仪器能够满足实验要求，指导老师梁倩倩多年从事基因克隆方面的分子研究，可以给予很好的指导 。 第三部分 研究内容 一 研究目标 1 克隆姬菇和荷叶离褶的HmHSP70基因 2 构建HmHSP70克隆载体；注册GENEBANK； 3 省级以上期刊发表研究论文1篇。 二 研究内容 1 提取姬菇、荷叶离褶伞的DNA、RNA 2 采用PCR或RT-PCR技术克隆HmHSP70基因； 3 HmHSP70克隆载体； 4 测序及序列分析； 5 注册GENEBANK。 三 拟解决的关键问题 荷叶离褶伞为祁连山低温型优良食用菌，由于甘肃河西地区日夜温差大，夏天高温可达35℃，本项目预期指标的实现，可望获得温度耐受性强的转基因荷叶离褶伞新品种，解除温度对荷叶离褶伞栽培及推广的限制，能在很大程度上降低推广栽培的成本。 四 实验材料 姬菇 荷叶离褶伞 第四部分 研究方法 研究路线如下： 第五部分 特色与创新之处 1 目前以基因工程技术培育食用菌新品种的研究工作不是很多，关于荷叶离褶伞的这方面工作国内外尚属空白。 2 本研究首次克隆荷叶离褶伞的HmHSP70基因，构建载体后，基因还可用于转化其他食用菌以提高品质，应用范围广泛。 第五部分 年度研究计划与预期成果 一 年度研究计划 第一阶段（12.12-13.1）阅读文献资料，设计试验方案，准备试验材料； 第二阶段（13.1-13.3） 提取DNA、RNA； 第三阶段（13.3-13.6） PCR扩増目标片段、构建克隆载体； 第四阶段（13.6-13.12）测序、构建表达载体，发表文章； 第五阶段（13.12） 撰写及修改论文准备答辩。 二 预期研究成果 获得姬菇、荷叶离褶伞HmHSP70基因， 注册GENEBANK； 获得HmHSP70基因表达载体； 发表论文一篇。 Company Logo LOGO 指导教师：梁倩倩 热激蛋白基因（HmHSP70）克隆 学 院： 农业与生物技术学院 讲解人：曹新文 合作者：姚晓琴 段东东 冯兴华 秦海红 项目的结构和主要内容 第一部分 ：立项依据 第二部分 ：实验条件 第三部分 ：研究内容 第四部分 ：研究方法 第五部分 ：特色与创新之处 第六部分 ：年度研究计划及预期成果 第一部分 立项依据 1 研究意义 高温常常限制作物、蔬菜、食用菌等的生长和推广，获得温度耐受性强的转基因新品种，解除温度限制，将大大降低推广栽培的成本。本研究预期目标若能实现，对建立食用菌基因工程研究平台具有较好的现实意义，我们将为我国食用菌行业增添一个新的珍稀品种，为甘肃食用菌产业的发展培育出一个新的增长点和新的支撑点，产生显著经济效益。 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 PCR扩增HSP70基因片段 克隆载体扩建 测序 表达载体构建 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 PCR扩增HSP70基因片段 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 PCR扩增HSP70基因片段 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 克隆载体扩建 PCR扩增HSP70基因片段 引物设计合成 姬菇、荷叶离褶伞DNA提取 RNA提取 克隆载