固定化酶和固定化细胞培训教学PPT课件.ppt

不同方法和载体固定化氨基酰化酶的最适温度 载体 方法 最适温度(℃ ） 游离 60 DEAE-葡聚糖凝胶 离子键结合法 72 DEAE-纤维素 离子键结合法 67 DEAE-葡聚糖凝胶 烷基化法 60 （3）、 固定化方法的影响 固定化细胞技术：利用物理或化学手段将具有一定生理功能的生物细胞，如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等，限制或定位在特定的空间区域，作为可重复使用的生物催化剂而加以利用的一门技术。 4、 细胞的固定化 ① 无需进行酶的分离和纯化，减少酶的活力损失，同时大大降低了成本； ② 可进行多酶反应，不仅可以作为单一的酶发挥作用，而且可以利用菌体中所含的复合酶系完成一系列的催化反应； ③ 对于活细胞来说，保持了酶的原始状态，酶的稳定性更高，对污染的抵抗力更强； ④ 细胞生长停滞时间短，细胞多，反应快。 固定化细胞的优越性： 固定化细胞的缺点： 必须保持菌体的完整，需防止菌体的自溶，否则影响产物的纯度； 必须抑制细胞内蛋白酶对目的酶的分解； 胞内多酶的存在，会形成副产物； 载体、细胞膜或细胞壁会造成底物渗透与扩散的障碍。 固定化细胞的分类 按细胞类型分：固定化微生物细胞、固定化植物细胞、固定化动物细胞 按细胞生理状态分：固定化死细胞（完整细胞、细胞碎片、细胞器）、固定化活细胞（增殖细胞、静止细胞、饥饿细胞） 固定化细胞的性质 固定化对酶产生的某些影响对细胞同样有表现，例如增加其稳定性。 由于细胞内环境的相对恒定和细胞的缓冲作用，固定化对胞内酶产生的影响不像固定化酶那样明显 固定化细胞除了受固定化因素影响外，还受细胞结构及细胞膜透性影响 固定化活细胞还要考虑菌体生长、生理生化及它们在颗粒内的分布等问题。 细胞固定化所用的方法 吸附法（依据细胞特性选择吸附载体） (1) 酵母（负电荷）　多孔陶瓷和塑料 (2) 霉菌（菌丝体长）　金属网丝 (3) 植物细胞　中孔纤维外壁 (4) 动物细胞（贴壁细胞）容器壁 细胞固定化所用的方法 包埋法 　包埋实质上是酶周围聚合(连接)的过程 (1)温度诱导的交联 　　琼脂（机械强度差，扩散困难） 　　甲叉菜胶　明胶 (2) 离子诱导交联 　　海藻酸钙 (3)光等诱导的交联 1) 聚丙烯酰胺 　 2) 光交联树脂（聚氨酯预聚物，光敏剂，光） 　　　 细胞种类 植物细胞 微生物细胞 动物细胞 细胞大小/um 20-300 1-10 10-100 倍增时间/h 12 0.3-6 15 营养要求 简单 简单 复杂 光照要求 大多数要光照 不要求 不要求 对剪切力 敏感 大多数不敏感 敏感 主要产物 色素、药物、香精、酶等 醇、有机酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶 疫苗、激素、 抗体、酶 细胞特性比较(固定化中要注意事项） 5、 辅酶的固定化（自学 P92-P95） 本章主要介绍了固定化技术的发展史、酶和细胞的固定化方法以及酶经固定化后性质的变化，从动力学方面分析了固定化后酶特性变化的原因，并简要介绍了酶反应器的结构特点。 固定化酶、固定化细胞是一种在空间运动上受到完全约束或局部约束的酶、细胞。近代工业化利用始于1969年固定化氨基酰化酶的应用。利用固定化技术，解决了酶应用过程中的很多问题，为酶的应用开辟了新的前景。如可使所使用的酶、细胞能反复使用，使产物分离提取容易，并在生产工艺上可以实现连续化和自动化，故在20世纪70年代后得到迅速发展 。其新的功能和新的应用正在迅速不断地扩展，是一项研究领域宽广、应用前景极为引人瞩目的新研究领域和新技术。 酶作为一种生物催化剂，因其催化作用具有高度专一性、催化条件温和、无污染等特点，广泛应用于食品加工、医药和精细化工等行业。但在使用过程中，人们也注意到酶的一些不足之处，如酶稳定性差、不能重复使用，并且反应后混入产品，纯化困难，使其难以在工业中更为广泛的应用。 * * * * * * * * * * 溴化氰法：含羟基的载体 将纤维素、琼脂糖等多糖类载体上的羟基用溴化氰活化，然后再在碱性环境下与酶偶联，即可制成固定化酶。 亚氨基甲酸酯类衍生物 重氮法：共价结合法中使用最多 具有芳香族氨基的水不溶性载体(Ph-NH2)在稀盐酸和亚硝酸钠中进行反应，成为重氮盐化合物，然后在弱碱性条件下再与酶发生偶合反应，得到固定化酶。 酶蛋白中的游离氨基、组氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基等参与此反应。 重氮法： 叠氮法：含有酰肼基团的载体 将带羧基、羧甲基等的载体在酸性条件下用甲醇酯化，水合肼处理形成酰肼，再用亚硝酸活化，生成叠氮化合物，最后与酶蛋白的氨基、羟基、巯基等偶联，形成固定化酶。 2.4 交联法 酶 双功能剂 双功能试剂：戊二醛、己二胺、双偶氮苯等 交联法（cros