有机合成纯化-硅胶柱层析.pptVIP

2021/3/14 * （一）吸附剂与洗脱剂 根据待分离组分的结构和性质选择合适的吸附剂和洗脱剂是分离成败的关键。 1．吸附剂的要求 ①对样品组分和洗脱剂都不会发生任何化学反应,在洗脱剂中也不会溶解。 ②对待分离组分能够进行可逆的吸附,同时具有足够的吸附力,使组分在固定相与流动相之间能最快地达到平衡。 ③颗粒形状均匀,大小适当,以保证洗脱剂能够以一定的流速（一般为1.5mL·min-1）通过色谱柱。 ④材料易得,价格便宜而且是无色的,以便于观察。 2、常用吸附剂的种类:硅胶、氧化铝、聚酰胺、硅酸镁、滑石粉、氧化钙（镁）、淀粉、纤维素、蔗糖和活性炭等。 2021/3/14 * 3、几种常见吸附剂的特性 （1）氧化铝:市售的层析用氧化铝有碱性、中性和酸性三种类型,粒度规格大多为100～150目。 碱性氧化铝（pH9—10）:适用于碱性物质（如胺、生物碱）和对酸敏感的样品（如缩醛、糖苷等）,也适用于烃类、甾体化合物等中性物质的分离。但这种吸附剂能引起被吸附的醛、酮的缩合。酯和内酯的水解、醇羟基的脱水、乙酰糖的去乙酰化、维生素A和K等的破坏等不良副反应。所以,这些化合物不宜用碱性氧化铝分离。 酸性氧化铝（pH3.5—4.5）:适用于酸性物质如有机酸、氨基酸等以及色素和醛类化合物的分离。 中性氧化铝（pH7—7.5）:适用于醛、酮、醌、苷和硝基化合物以及在碱性介质中不稳定的物质如酯、内酯等的分离,也可以用来分离弱的有机酸和碱等。 2021/3/14 * （2）硅胶:硅胶是硅酸的部分脱水后的产物,其成分是SiO2·xH2O。柱色谱用硅胶一般不含粘合剂。 适用范围:非极性和极性化合物,适用于芳香油、萜类、甾体、生物碱、强心甙、蒽醌类、酸性、酚性化合物、磷脂类、脂肪酸、氨基酸,以及一系列合成产品如有机金属化合物等。 （3）聚酰胺:色谱用聚酰胺主要包括尼龙6（聚己内酰胺）和尼龙66（聚己二酰己二胺）两种,分子量一般在16000～20000,其亲水性和亲脂性均较好,因此既可分离水溶性成份,也可分离脂溶性成分。可溶于浓盐酸、甲酸及热的乙酸、甲酰胺和二甲基甲酰胺中;微溶于乙酸和苯酚等;不溶于醇、氯仿、丙酮、乙醚、苯等;对碱稳定,对强酸可水解。 2021/3/14 * 分离对象:能与聚酰胺形成氢键的化合物,如酚类、酸类、醌类、硝基化合物及含羟基、氨基、亚氨基的化合物及腈和醛等类化合物。 聚酰胺在水中吸附能力的规律: 形成氢键的基团(如:酚经基、按基、酪基、硝基等)越多,则吸附力越强。如:丁二酸＞丁酸 2021/3/14 * 形成氢键的位置与吸附力有很大关系。对位、间位酚羟基使吸附力增大,邻位使吸附力减小。如: 芳香环、共轭双键多者吸附力大,少者吸附力小。如: 2021/3/14 * 若形成分了内氢键,则使化合物的吸附力减小。如: （4）硅酸镁:中性硅酸镁的吸附特性介于氧化铝和硅胶之间,主要用于分离甾体化合物和某些糖类衍生物。为了得到中性硅酸镁,用前先用稀盐酸,然后用醋酸洗涤,最后用甲醇和蒸馏水彻底洗涤至中性。 2021/3/14 * 3．吸附剂的活度及其调节 吸附剂的活性取决于它们含水量的多少,活性最强的吸附剂含有最少的水。吸附剂的活性一般分为五级,分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ表示。数字越大,表示活性越小,一般常用Ⅱ～Ⅲ。 向吸附剂中添加一定的水,可以降低其活性。反之,如果用加热处理的方法除去吸附剂中的部分水,则可以增加其活性,后者称为吸附剂的活化。 2021/3/14 * 4、实验操作 吸附剂用量的确定→柱子的选择→装柱→柱留体积的测量→加样或拌样→洗脱→分部收集→检测→合并→浓缩 硅胶: 吸附色谱——1g样品/20～50g ,特例1g样品/500～1000g,用前最好120oC 烘24h,可不做活性测定。 分配色谱——1g样品/100～1000g,特例1g样品/10000g。 2021/3/14 * 色谱柱的选择: 有玻璃柱和不锈钢柱两种; 径长比一般为1:10～1:20,特例1:40; 内壁光滑均匀,上下粗细一样,管壁无裂缝,活塞密封良好; 根据吸附剂用量（体积）确定柱子的大小。 装柱:有干装法和湿装法两种。 干装法——在下端减压抽气的同时,将吸附剂通过长径漏斗缓缓到入柱内。 湿装法——①准确加入一定体积的溶剂,然后缓慢加入吸附剂,必要时可轻敲柱壁,排除多余溶剂,计算柱留体积;②准确量取一定体积的溶剂倒入称量好的吸附剂,间歇性搅拌数次,静置过夜,次日在搅拌下装柱,计算主留体积。 2021/3/14 * 加样: ①将样品溶于合适的溶剂,在不扰动吸附剂层面的情况下,加到柱体上面。最后在用少量清洁溶剂对主壁洗涤2～3次; ②将样品溶于合适的溶剂后,在搅拌下加入样品量3～5倍的吸附剂,晾干至粉末状,然后在不扰动吸附剂层面的情况下