和通路参与异氟醚发育期神经毒性的机制.docx

上海交通大学医学院2012级博士学位论文上海交通大学医学院博士学位论文 上海交通大学医学院2012级博士学位论文 上海交通大学医学院博士学位论文 IGF．1／P13K／Akt／S6和IGF．1脱EK／ERK／S6 通路参与异氟醚发育期神经毒性的机制研究 The Mechanism Study of IGF-·1／P13K／Akt／S6 and IGF··1／MEK／ERK／S6 Pathways in the Developmental Neurotoxicity of Isoflurane 研究生姓名：李国辉 研究生学号：0127209106 指导老师：于布为教授 学科专业：麻醉学 申请学位：博士 培养单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院 研究方向：全身麻醉药发育期神经毒性 答辩日期：2015年5月 万方数据 上海交通大学医学院2012级博士学位论文上海交通大学 上海交通大学医学院2012级博士学位论文 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立 进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意 识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：力a埽 日期：≯o年朔IⅦ 万方数据 上海交通大学医学院2012级博士学位论文上海交通大学 上海交通大学医学院2012级博士学位论文 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许 论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密耐。 (请在以上方框内打“4) 学位论文作者签名：店1氯％ 指导教师签名：子 日期：沙√年 汨I／日 日期：刀厂年、，月，，日 万方数据 上海交通大学医学院2012级博士学位论文摘要 上海交通大学医学院2012级博士学位论文 摘要 目的： 全身麻醉药发育期神经毒性是近年来麻醉学界乃至社会广泛关注的热点。动物 研究表明，异氟醚可引起出生后6～7天新生鼠海马和前额叶等区域细胞凋亡，损害 突触形成，并导致成年后学习记忆等认知功能降低。然而，异氟醚引起上述表现的 具体机制仍不清楚。胰岛素样生长因子l(insulin—like growth factor 1，IGF．1)通过 P13K／Akt通路和MEK／ERK通路激活核糖体S6蛋白，促进蛋白质合成、细胞生长和 细胞存活，并调控树突发育、树突棘发育、突触形成等大脑发育过程。鉴于 IGF．1／P13K／Akt／S6和IGF．1／MEK／ERK／S6通路在大脑发育中的重要性，本课题将研 究异氟醚麻醉暴露后该通路的激活状态，以及其在异氟醚所致细胞凋亡、突触形成 损害以及成年后学习记忆下降中的角色。 方法： 1．研究异氟醚暴露对发育期神经元IGF．1／P13K／Akt／S6和IGF．1／MEK／ERK／S6通路活 性的影响 将原代培养7天海马神经元或出生后7天新生大鼠暴露于对照混合气或1．5％异 氟醚不同时间，采取ELISA、免疫荧光和Western blot法检测S6蛋白磷酸化程度和 IGF．1表达。结合P13K／Akt通路和MEK／ERK通路抑制剂，明确这两条通路在异氟 醚介导IGF．1／S6活性表现中的作用。 2．研究IGF．1／P13K／Akt／S6和IGF．1／MEK／ERK／S6通路在异氟醚介导神经元凋亡中的 作用 将原代培养7天海马神经元暴露于对照混合气或1．5％异氟醚3h、6h、12h，活 化caspase．3或FITC．Annexin V法检测神经元凋亡水平。随后，给予外源性IGF．1和 PF．4708671分别激活和抑制IGF．1／P13K／Akt／S6和IGF．1／MEK／ERK／S6通路，研究该 通路在异氟醚介导细胞凋亡中的作用。 3．研究IGF．1／P13K／Akt／S6和IGF．1／MEK／ERK／S6通路在异氟醚介导突触形成损害中 万方数据 上海交通大学医学院2012级博士学位论文的作用 上海交通大学医学院2012级博士学位论文 的作用 将原代培养10天海马神经元暴露于对照气体或1．5％异氟醚6h、12h、24h，收 集细胞，检测兴奋性突触标志蛋白PSD95和抑制性突触标志蛋白Gephyrin表达水平， 从而调查异氟醚对兴奋性突触和抑制性突触的影响。然后，给予外源性IGF．1或 PF．4708671，观察IGF．1／P1