信号通路在大鼠电针预处理心肌缺血再灌注损伤保护中的作用.docxVIP

博士学位论文miRNA．2 博士学位论文 miRNA．2 1 4／C a2+信号通路在大鼠电针预处 理心肌缺血．再灌注损伤保护中的作用 博士研究生：柳培雨 指导教师：徐世元 摘要 研究背景：心血管疾病是发达国家导致死亡的主要疾病，仅在美国就影响 着8千余万人的身体健康。其中心肌梗死、心脏手术、体外循环结束后发生的 心肌缺血一再灌注(I瓜)损伤的程度对上述心血管疾病预后至关重要。心肌缺血 ．再灌注损伤的分子机制十分复杂，现有的临床预防与治疗方法的效果不甚理想。 已有一些国内外学者对电针预处理技术应用于心脏保护进行了相关研究， 并证实了电针预处理的可行性。电针疗法是由神经电刺激疗法与中医针灸疗法 相结合而形成的，是指在中医毫针的基础上，在毫针上连接脉冲发生器，施加 接近人体生物电的微电流刺激，使其在原来毫针刺激的基础上，对穴位施以不 同波幅连续波、断续波等刺激，对机体实施持续、稳定、精确、可控的电刺激， 并产生电生理效应。电针预处理作为有效的心肌保护方法，通过启动机体内源 性保护机制，调动机体潜能，提高机体适应应激反应的能力。电针预处理操作 便利，并可避免药物预处理的诸多不良反应，具有适应人群广的优势，有较为 广阔的临床应用前景。相关的基础和临床研究已经证实，单独“内关”穴针灸治 疗对心肌缺血有显著疗效。然而，针灸和电针的心脏保护的可靠机制尚未明确。 微小核糖核酸(micro ribonucleic acid，microRNA，miRNA)是一类内源性 的小核苷酸片段，现已检测出700余种。大约30％的人类基因受miRNAs调节。 miRNAs在众多心脏疾病的发生发展中也发挥着重要作用，诸如心肌肥大、心 肌凋亡和血管生成等生理和病理进程。其中miRNA．214在不同的细胞中发挥着 万方数据 中文摘要多种生物学作用，其可通过对多种靶基因的调控，在许多疾病中都发挥着重要 中文摘要 多种生物学作用，其可通过对多种靶基因的调控，在许多疾病中都发挥着重要 的调节作用。研究证实，在心肌损伤时miRNA．214的表达增加，对于心脏功能 的维持具有保护作用。心肌发生缺血．再灌注损伤时，心肌缺血．再灌注损伤机 制中的细胞凋亡、PⅡN机制以及HIFlAN等机制均可不同程度的被miRNA．214 所有效抑制，从而有助于调动肌缺血．再灌注时的内源性心脏保护机制。在对预 防和治疗治疗心肌缺血．再灌注损伤性疾病的靶向分子的相关研究中，有学者提 出了miRNA．214有可能成为临床预防和治疗心肌缺血．再灌注损伤性疾病时的 靶向分子的可能性。相关体内实验证实，电针预处理能够一定程度上减少心肌 梗死面积、逆转心功能、降低血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活 性。现有的研究资料尚不能确定miRNAs在电针预处理对心肌缺血．再灌注损伤 保护机制中的角色和作用。miRNA．214是许多心脏应激性疾病的敏感标志物， 它在缺血．再灌注所致心脏损伤时表达上调，并可通过控制Ca+超载，乃至在缺 血．再灌注时发挥保护作用。缺血．再灌注时心肌细胞损伤的重要原因之中包括 心肌细胞内游离Ca2+浓度(【Ca2+]i)的超载。众所周知，在心肌缺血．再灌注损 伤后，心肌细胞内会发生Ca2+超载，可导致钠／钙交换蛋自1(NCXl)构型发生改 变。随后，B淋巴细胞肿瘤因子2样蛋白11(BIM)、钙调素依赖性蛋白激酶118 (CaMKIIS)、亲环素D(CypD)等Ca2+通道的下游效应器受构型发生变化的 NCXl进一步激活，介导之后的心肌细胞死亡进程。同时，有关研究提出针灸 治疗后的血清也可降低心肌细胞内的Ca2+含量，电针预处理有利于维持心肌细 胞内Ca2+稳态。数项研究结果显示，对心肌细胞Ca2+稳态的维持同样也是电针 预处理对于缺血．再灌注损伤发挥保护作用的重要机制之一。近期，有相关研究 证实大鼠心脏缺血．再灌注时Ca2+超载所致的心肌细胞死亡进程能够在 miRNA．214的作用下得到有效抑制。此外，笔者近期研究发现电针预处理对大 鼠正常情况下H9c2细胞的Ca2+和NCXl、BIM、CaMKIl8和CypD等相关蛋 白具有调节作用。 为进一步揭示电针预处理的相关机制，此研究将研究重点放在了对心脏具 万方数据 博士学位论文有保护作用的miRNAs上。多项研究结果证实了一系列心脏应激反应中的敏感标 博士学位论文 有保护作用的miRNAs上。多项研究结果证实了一系列心脏应激反应中的敏感标 志物中包括miRNA．214，在心脏肥大、心肌梗死和心脏衰竭时均发现有 miRNA．214的表达上调。大鼠发生心肌缺血．再灌注时损伤时的内源性心脏保护 机制中，miRNA．214表达上调的机制为学者所发现和证实。结合上述研究结果， 此研究假设miRNA．214参与介导了电针预处理对心肌缺血．再灌注