乳腺上皮细胞中调控的靶点及作用.docxVIP

Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)·no NO．：120610405 Dissertation for the Master Degree The function and regulation targets of miR--142-·3p in the human mammary epithelial cells of MCF--I OA C andidate：Xie xuej iao Supervisor：Professor Wang chunmei Degree C ategory：Master of Agriculture College：College of Veterinary Medicine First level discipline：Veterinary medicine Second level discipline：Basic Veterinary Medicine Harbin China June 2015 万方数据 目录目 目录 目 录 摘要 ．．I 英文摘要 ．．III 1前言 。1 1．1miRNAs的研究进展 1 1．1．1 miRNAs的发现及命名 1 1．1．2 miRNA的生成过程及作用机制 1 1．1．3 miRNA的应用 ．2 1．1．4 miRNA靶基因的鉴定 一4 1．2 miR．142．3p研究进展 ．．5 1．3靶基因的研究进展 ．5 1．4研究目的及意义 ．6 2材料与方法 ．7 2．1实验材料 7 2．2实验仪器 ．7 2．3实验试剂 7 2．4实验方法与步骤 ．8 2．4．1 miR．142．3p靶基因的筛选 8 2．4．2人乳腺上皮细胞的培养 8 2．4．3 miR．142．3p靶基因的筛选 ．9 2．4．4过表达miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A的影响 11 2．4．5抑制miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A的作用 ．．17 2．4．6数据分析与处理 18 3结果 ．．19 3．1 miR．142．3p的靶基因的鉴定 19 3．2过表达miR一142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A的影响 ．．19 3．2．1过表达miR-142．3p对乳腺上皮细胞miR-142—3p基因及PRLR基因表达的影响 ． ．：!() 3．2．2过表达miR．142．3p对乳腺上皮细胞中PRLR蛋白及相关通路蛋白表达的作用．．20 3．2．3过表达miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF一10A增殖能力的影响 21 3．2．4过表达miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A凋亡的作用 23 3．2．5过表达miR一142．3p对乳腺上皮细胞MCF一10A侵袭能力的影响 24 3．2．6过表达miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A粘附的作用 25 3．2．7免疫组化 26 3．2．8过表达miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A分泌甘油三酯能力的测定 26 3．2．9过表达miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF一10A乳糖分泌的作用 28 I 万方数据 东北农业大学农学硕士学位论文3．3抑制miR。142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A的影响 东北农业大学农学硕士学位论文 3．3抑制miR。142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A的影响 ．．28 3．3．1抑制miR．142．3p对乳腺上皮细胞miR-142．3p基因及PRLR基因表达的影响 ．．28 3．3．2抑制miR．142．3p对乳腺上皮细胞中PRLR蛋白及相关通路蛋白的作用 29 3．3．3抑制miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．IOA增殖能力的影响 30 3．3．4抑制miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．IOA凋亡能力的影响 32 3．3．5抑制miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF—IOA侵袭能力的影响 33 3．3．6抑制miR-142．3p对乳腺上皮细胞MCF一10A粘附能力的影响 34 3．3．7免疫组化 ．35 3．3．8抑制miR．142．3p对乳腺上皮细胞MCF．10A分泌甘油三酯能力的测定 35 3．3．9抑制miR一142．3p对乳腺上皮细胞MCF一10A分泌乳糖的作用 36 4讨论 37 4．1 miR-142．3p靶基因的筛选 37 4．2 miR．142．3p对乳腺上皮细胞泌乳功能及相关信号通路基因的调节作用 37 4．3 miR-142．3p对乳腺上皮细胞增殖、凋亡、侵袭和粘附能力的影响 39 5结论 ．．4l 致谢 ． ．．42 参考文献 ．．43 附录 48 攻读硕士学位期间发表的学术论文 49 II 万方数据 CONTENTS