在大鼠脑梗死模型中的作用及机制.docxVIP

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应法律责任。 ■． 1 研究生签名：磁叶导师签章：易互菇—c级学院领专莓章：’羹·。．≮．j』 ≯7j．7笨3 j习．)；!妇。 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， I 新擗痧∥ 文责自负。 研究生签名： 弦砷 劲岁年弓月≥驴日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文MCU、MICUl在大鼠脑梗死模型中的作用及机制 前言日U舌 9 材料与方法 1 0 结果 1 8 附图 20 讨论 28 结论 3 O 参考文献 3 1 综述 线粒体钙离子单向转运体的研究进展 34 致谢 45 个人简历 一 ．46 万方数据 中文摘要MCU、 中文摘要 MCU、 CUl在大鼠脑梗死模型中的作用及机制 摘 要 目的： 脑梗死是神经内科常见病、多发病，病死率及致残率很高。早期溶栓 是急性脑梗死有效的治疗方法，但是溶栓治疗严格的时间窗使绝大多数患 者很难在规定的时间内到医院接受治疗。脑梗死后神经损伤的病理生理机 制是比较复杂的级联反应，主要包括兴奋性氨基酸毒性、氧化应激、炎症 和凋亡等。缺氧时，谷氨酸兴奋毒作用的关键病理过程之一是钙离子内流 引起钙超载。钙超载导致一系列钙依赖性酶被激活，致使自由基产生增加。 从而引起线粒体受损、脂质过氧化、ATP匮乏、ROS产生、核酸断裂等， 最终导致神经元死亡。线粒体钙浓度与线粒体能量代谢、膜通透性密切相 关，也会对胞浆钙信号进行修饰进而影响细胞功能。线粒体钙离子单向转 运体(Mitochondrial calcium uniporter，MCU)是新近鉴定出的线粒体内 膜上参与线粒体钙摄取的重要结构。MICUl(Mitochondrial calcium uptake 1)是MCU的调节蛋白，其对MCU的作用是激活还是抑制，尚且存在争 议。由此看来，这种高度复杂而精确的调节作用仍有待深入研究。新近研 究表明MCU参与神经细胞谷氨酸兴奋毒，抑制MCU可减少线粒体钙摄 取，保护线粒体功能从而减少神经元死亡。因此我们思考MCU、MICUl 与脑梗死的相关性，能否通过干预MICUl与MCU的表达来扼制钙超载 从而挽救脑梗死中受损细胞?这一新的思路研究期望提供一个脑梗死治 疗的新靶点。 方法： 1采用成年健康雄性Sprague．Dawley大鼠，随机分为正常对照组 (contr01)、假手术组(sham)、大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)组(分为3h、6h、12h、24h、48h、72h六个时间点)， 应用Longa等的线栓法建立MCAO大鼠模型。术后麻醉清醒后对大鼠 进行神经功能评分。在上述不同时间点将动物断头处死，用2％2，3，5．三 苯基四唑氮红(triphenyl tetrazolium chloride，TTC)染色法测算脑梗死体 积， 用蛋白质印迹法(Western Blot)、实时定量荧光聚合酶链式反应 万方数据 中文摘要(Real-time 中文摘要 (Real-time reverse transcription-quantitative Polymerase Chain Reaction， RT．qPCR)和免疫组化来观察MCU、MICUl、cleaved．caspase3的表达情 况，用透射电镜观察细胞及线粒体超微结构变化，用流式细胞分析技术检 测线粒体功能。 2采用成年健康雄性Sprague．Dawley大鼠，随机分为正常对照组 (contr01)、假手术组(sham)、MCAO 12h组、尤瑞克林+MCAO组(尤 瑞克林0．00875PAN／kg+MCAO)。给药组动物梗死后尾静脉注射尤瑞克 林0．00875PAN／kg，正常对照组、假手术组和MCAO组给予等容量生理 盐水。术后麻醉清醒后对大鼠进行神经功能评分。梗死后12h大鼠断头处 死，TTC染色法测算脑梗死体积，用Western Blot来观察MCU及凋亡蛋 白cleaved．caspase3的表达情况。 结果： l MCAO组各个时间点可见左侧肢体偏瘫症状，神经功能