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primer5和Oligo结合设计引物步骤及心得 来源：北京力途科技有限公司 2010-5-21 访问量：5404 评论（0） 分享1 一、引物设计 step by step 1、 在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的 mRNA，在CDS选项中，找到编码区 所在位置，在下面的 origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。 2、 用 Primer Premier5 搜索引物 打开Primer Premier5，点击sequenee,出现输入序列窗口， Copy目的序列在输入 框内（选择As ），此窗口内，序列也可以直接翻译成蛋白。点击 Primer，进入引物窗口。 此窗口可以链接到 引物搜索”、引物编辑”以及 搜索结果”选项，点击Search按钮， 进入引物搜索框，选择 “ PCR primers ”， “ Pairs,”设定搜索区域和引物长度和产物长度。在 Search Parameters 里面，可以设定相应参数。一般若无特殊需要，参数选择默认即可，但 产物长度可以适当变化，因为 100?200bp的产物电泳跑得较散，所以可以选择 300? 500bp. 点击OK，软件即开始自动搜索引物，搜索完成后，会自动跳出结果窗口，搜索结果 默认按照评分（Rating ）排序，点击其中任一个搜索结果，可以在 引物窗口 ”中，显示出该 引物的综合情况，包括上游引物和下游