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第五章　植物细胞培养和次生代谢产物生产第五章 植物细胞培养和次生代谢产物生产 主要内容： 第一节 植物单细胞培养技术 第二节 植物细胞的大规模培养 第三节 植物细胞生物反应器 第四节 植物细胞培养生产次生代谢产物 学习的目标与要求： 掌握单细胞分离和培养的方法，了解植物大规模培养方法，了解植物细胞生物反应器的设计与要求。了解利用植物细胞培养生产次生代谢产物的流程。植物细胞培养和次生代谢产物生产 植物是人类赖以生存的食物和药品的重要来源之一。80%的天然产物来自于高等植物。 资源的过度采掘，造成了许多植物资源的日益枯竭。 通过植物细胞培养是弥补这方面的重要研究方向植物细胞培养和次生代谢产物生产红豆杉惨遭剥皮植物细胞培养和次生代谢产物生产细胞产物的工厂化生产植物细胞培养和次生代谢产物生产 什么是植物细胞培养?与组织培养的区别? 植物细胞培养(plant cell culture):是指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养并使其增殖，获得大量细胞群体的一种技术。 1979年国际组织培养协会专业术语委员会建议： 组织培养：从机体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外进行培养，使之生存或生长成组织。 细胞培养：动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。植物细胞培养和次生代谢产物生产与植物组织培养的区别 细胞培养⑴培养对象各种形式的植物细胞⑵培养目的获得所需的细胞和各种所需的产物；进行生物转化；将外源底物转化为所需的产物。 植物组织培养⑴培养对象 植物的各种组织、器官⑵培养目的 获得所需的植物组织和再生植株；快速繁殖。植物细胞培养和次生代谢产物生产植物细胞培养的应用获得的细胞群体可以作为制备有价值代谢产物的原料，也可以作为基础研究的材料。同时植物细胞培养技术也是人工种子、原生质体培养、花药培养等的支撑技术植物细胞培养和次生代谢产物生产与微生物相比，植物细胞的特点：细菌、真菌、植物细胞都有细胞壁细菌无成形的细胞核，真菌、植物细胞有成形的细胞核。细菌只有核糖体一种细胞器。植物细胞比微生物细胞大植物细胞培养和次生代谢产物生产植物细胞的特点：植物细胞直径一般约会10-200微米，平均直径比微生物细胞大30-100倍。植物细胞很少以单一细胞形式悬浮生长，通常以一定细胞数的非均相细胞团方式存在。植物细胞具有纤维素细胞壁和大的液泡，很容易被剪切力损伤。与微生物细胞相比，植物细胞生长速度慢，操作周期长，分批培养一般需要2-3周，半连续或连续培养时间一般长达2-3个月植物细胞培养基成分丰富而复杂，适合微生物生长，因此防止污染更困难植物细胞培养一般需要光照，通过光合作用合成有机物，因此氧气和CO2的含量与传递对细胞培养影响较大。植物细胞培养和次生代谢产物生产植物细胞培养的方法 按培养规模：小规模培养和大规模培养 按培养方式：平板培养法、悬浮培养、看护培养、 微室培养等； 按培养基类型：固体培养和液体培养 按要求产物:用于诱变的细胞培养和生产次生产物的细胞培养。一、植物单细胞培养技术 固体培养：是在微生物培养基基础上发展起来的植物细胞培养方法。一般添加一定比例的琼脂起固化作用。 固定化培养：属于固体培养，指将游离细胞包埋在多糖或多聚化合物制备的网状支持物中，培养液呈流动状态的无菌操作技术。　液体培养：也是在微生物培养基础上发展起来的。　可分为: 振荡培养、旋转培养、静止培养、纸桥培养 细胞悬浮培养：属于液体培养，指植物细胞或小细胞团在液体培养基中大规模进行培养。一、植物单细胞培养技术振荡培养箱一、植物单细胞培养技术1.单细胞的分离 1)机械法：指通过机械磨碎、切割植物体从而获得游离的单细胞。 优点：细胞不受酶伤害。 缺点：只适合于排列松散的薄壁细胞、效率低、产量少。 1969年，Gnanam和Kulandaivelu用该方法分离出几种成熟叶片叶肉细胞。撕去下表皮露出叶肉细胞用解剖刀刮下细胞一、植物单细胞培养技术 1.单细胞的分离—机械法第一种方法：用刀片刮叶片加研磨介质研碎成粉过滤、离心一、植物单细胞培养技术 1.单细胞的分离—机械法第二种方法：叶片研碎、离心一、植物单细胞培养技术 1.单细胞的分离 2）酶解法：指用专一的水解酶(纤维素酶、果胶酶、琼脂酶等）在温和条件下分解胞间层，分离细胞。　优点：最有效的一种方法。　缺点：成本较高，酶对细胞有一定伤害。　1968年，Takebe等用该方法分离烟草叶肉细胞成功。加果胶酶过滤、离心一、植物单细胞培养技术 1.单细胞的分离一、植物单细胞培养技术1.单细胞的分离机械法和酶解法比较细胞不受到酶的伤害；不用质壁分离；细胞产量低；细胞易破。机械法细胞受到酶的伤害；要质壁分离；细胞产量高；细胞不易破。酶解法一、植物单细胞培养技术1.单细胞的分离3）由培养组织分离单细胞：指将愈伤组织反复继代，