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找答案……;电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身 带相反电荷的电极移动的现象。 ;概 述;琼脂糖凝胶; 琼脂糖 半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。; 琼脂糖凝胶的特点;（二）缺点 1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低。 2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制。 3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。 4.与聚丙烯酰胺电泳相比，分辨率低。 ;影响核酸凝胶电泳的因素：;什么是迁移率;1、 DNA的分子大小;2、 琼脂糖浓度;配制多大浓度的琼脂糖凝胶，要根据被检的 DNA分子大小来确定。 ;3、 DNA分子的构象;4、 电源电压;5、嵌入染料的存在;常用染料;;6、 离子强度影响;常用的电泳缓冲液;实验步骤 ⑴ 1g 琼脂糖加入100ml 1×TAE电泳缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。 （冷却到60℃，加入100μl的0.5mg/ml EB，并摇匀。）;⑵ 用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）倒入，室温冷却凝固。;;⑹ 将凝胶放入EB染液中染色5-10min,用清水稍微漂洗。 ⑺ 将染色后的凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观察罩，打开紫外灯，可见到发出荧光的DNA条带。 ;植物总（核）DNA样品应呈现一条迁移率很小的整齐条带。; ;琼脂糖凝胶电泳的实验技巧和方法;;;注意事项;;操作;使用3 mg的DNA Marker DL　2,000（500 ng/条带）进行1%的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb，750bp，500bp，250bp，100bp。;二、聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶是三维网状结构的凝胶，其为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。;;聚丙烯酰胺凝胶有下列特性： (1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； (2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶； (3)对pH和温度变化较稳定；;;; 聚丙烯酰胺凝胶电泳分为连续系统与不连续系统两大类。 目前常用的多为圆盘电泳(如图1)和板状电泳(如图2)，两者电泳原理完全相同。 ;图1 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图(A为正面,B为剖面)(1)样品胶pH6.7 (2)浓缩胶pH6.7 (3)分离胶pH8.9 (4)电极缓冲液pH8.3;图2 夹心垂直板电泳槽示意图 图3 凝胶模示意图;不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。 浓缩胶是大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。 分离胶是小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。 电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。 2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。; 图4 电泳过程示意图A为电泳前3层凝胶排列顺序，3层胶中均有快离子，慢离子B显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。C显示蛋白质样品分离成数个区带。;（二）影响凝胶聚合的因素 1、试剂质量 2、凝胶浓度 3、温度和氧气的影响 ;凝胶电泳的操作要点;实验步骤 ;;制备浓缩胶：配制好3%浓缩胶。将胶模 中上层水倾倒出去，用滤纸 吸干余水。倒入浓缩胶插好 样品梳，注意避免汽泡出现。;;;电泳:连接直流稳压电源，矮板连负极，打 开电源开关。 调节电流，进入分离胶之前为 10mA，进入分离胶之后为2OmA。;;;;烟曲霉菌中抗真菌活性肽类物质的分离与纯化;三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳;（二）SDS-聚丙烯酰胺凝胶胶体的制备 ;（三）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的优缺点 及应用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有设备简单，样品用量甚微，操作方便等优点，现已成为测定大多数蛋白质分子量的常用方法 ;;电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身 带相反电荷的电极移动的现象。 ; 琼脂糖凝胶的特点;什么是迁移率;1、 DNA的分子大小;6、 离子强度影响;;实验步骤