临床免疫学检验技术.pptxVIP

临床免疫学检验技术 ;一、概述 ;一、概述;一、概述;二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 ;二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 ;二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 ;二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 ;二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 ;二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 ;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） ;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） ;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） ;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） ;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） ;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） ;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）;三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;四、临床免疫室内质控;五、ELISA检测中的注意事项;试剂因素:抗原抗体的纯度, 抗体的亲和力、标记物的比活性或免疫活性等均对测定结果产生直接影响。试剂盒的稳定有效期, 运输条件及储存方式等也均会对结果产生一定程度影响。;ELISA检测的主要影响因素;ELISA检测的主要影响因素;ELISA检测的主要影响因素;设备;设备;RF多为IgM型，也有IgG和IgA型。RF具有与变性IgG产生非特异性结合的特点，因此在ELISA检测过程中可能与固相上包被的抗体及酶标抗体结合，并将这藕连起来产生假阳性结果。这种情况在利用捕获法测定IgM型抗体的过程中尤其严重。因为捕获法测定IgM型抗体试剂盒中固相上包被的抗体为抗人μ链。;内源性干扰;内源性干扰;溶血：Hb含有的血红素基团具有类似过氧化物的活性，若标本中Hb浓度过高则可能吸附于固相并于随后加入的HRP底物反应显色。;外源性干扰：;外源性干扰：;溶血和非溶血、脂浊与非脂浊两组样品A 值无统计学意义。 AFP、RF、补体、自身抗体阳性样品的吸光度值明显高于对照组吸光度值, 具有统计学意义, 这可能是AFP、RF、补体和某些自身抗体能够与固相一抗, 标记二抗Fc 结合或影响它们的结合而造成假阳性;;建议: ①使用抗凝血标本, 便于标本的离心分离。②不抗凝血液标本过夜之后才检测,让血凝块更好地收缩,让标本中的非特异性物质被充分地包裹,降低非特异性反应所致的假阳性率[2 ] 。③标本离心时,加大离心转速,延长离心时间,使红细胞和纤维蛋白充分沉降,使标本的离心分离更加彻底[3 ] ④标本加样时避免加入红细胞和/ 或纤维蛋白,避免这两种干扰物质对实验结果的影响;;12 份HBsAg 阳性血清标本按常规检测, 加显色剂后, 不加终止剂,在酶标仪上每5min 测一次410nm OD 值;;方法1：检测样本39 ℃水浴,反应孔底部不接触水面; 方法2：37 ℃水浴,反应孔底部2 /3浸入水中; 方法3：反应板置37℃干式孵育箱孵育;三种不同的温育方式均会导致边缘效应, 中央孔和周围孔的吸光度有显著性差异 但水浴法温育比较稳定, 边缘效应相对较小, 孵箱法较大, 微波法最为明显。 ;;12 份HBsAg 阳性血清标本按常规检测, 加显色剂后, 不加终止剂,在酶标仪上每5min 测一次410nm OD 值;;同步稀释测定法 PEG法:酶标二抗试剂中加入4% PEG600 振动态ELISA法:，该方法可将HOOK 效应发生的临界浓度减少两个稀释度 尽量选择测定范围宽的试剂盒； 每一批号试剂盒随样本做高浓度质控(10000ng/ml)：;注：计算公式： 根据正态分布u检验单侧99.5%的可信限， u值=2.58;;以(CO -2 s ) 作为阳性低限判断值, 其中s 值是以卫生部临检中心临界质控血清(HBsAg 1 ng/ml , 抗HCV 2 NCU /ml 的RCV K 所测得的s 值。CO 至(CO —2 s ) 的范围称为灰区。理由为: 国产试剂盒的CO 一般是以阴性对照A 值加或乘一个常数得出, 阴性对照是小牛血清而非人血清, A 值不超过0105即按0105