(完整版)液相色谱质谱联用的原理及应用.pptVIP

高效液相色谱 ―― 电喷雾串联质谱 法测定清开灵复方中胆酸 ? 采用 HPLC/MS/MS 技术，从清开灵注射液中， 通过分子量、二级质谱碎片信息定性测定了清 开灵复方中的胆酸。 ? 直接进样实验。清开灵注射液经过初步化学处 理后采用电喷雾（ ESI ）离子源，在负离子扫 描方式下，得到一极质谱图、即分子离子峰 - [M-H] ，再用二级质谱（ MS/MS ）扫描目标分 子离子的碎片峰。再以相同的实验条件对标准 品进行测定，做出其一级、二级质谱图。 通过对样品进行分子离子峰的扫描发现 [M-H] - 的峰中有一个很强的 407 ，根据样 品处理过程以及对复方各单味药材的研究，其应该为一有机酸的负离子峰，并 初步推断其为胆酸。（胆酸的分子量为 408 ）。如图所示：通过对照样品 ( 右 ) 和 标准品（左）的二级质谱图，发现其主要碎片峰均吻合较好。 如何用 API LC-MS/MS 检测硝基呋喃类代谢物 ? 第一步： 配制衍生化后的硝基呋喃代谢物标准溶液，乙 ? ? ? ? ? ? 腈 / 水体系，浓度 10PPM 确认仪器已经校准，气体、电压工作正常。 测试条件： 离子化方式 : ESI+ 进样 5ul/min ， Q1 SCAN 观察 M/Z 335 ， 236 ， 249 ， 209 及同位素内标峰，通过调节 DP ，使这几个峰最强。 注意： 1 如买来的是已经衍生化的标准品，则可四种混配。 2 如是用户由硝基呋喃代谢物衍生化的，最好四种 分别配制，要求 Q1 SCAN 能明显观察到上述 离子。下图 是一个用户的混标，只看到 335 和 209 。 +Q1: 0.025 to 0.602 min from Sample 1 of nf-q1.wiff (Turbo Spray), Smoothed 7.8e6 7.5e6 7.0e6 6.5e6 6.0e6 5.5e6 5.0e6 145.0 240.9 100.8 136.6 Max. 7.8e6 cps. I n t e n s i t y , c p s 117.0 4.5e6 4.0e6 3.5e6 3.0e6 2.5e6 2.0e6 104.7 1.5e6 1.0e6 5.0e5 100 120 129.7 176.0 309.0 274.1 255.1 208.9 230.9 247.0 311.0 162.8 178.9 321.0 373.0 318.9 335.3 140 160 180 200 220 240 260 m/z, amu 280 300 320 340 360 380 400 ? 第二步： 以第一步测得值为母离子，做 PRODUCT ION SCAN （ MS2 ），调节 CE 等参数，使母，子 离子都具有一定强度，平滑后得到 MS2 谱，从各 母离子中各选择 2 个最高的子离子，分别为 呋喃它酮 AMOZ ： M/Z 291 ， 262 ； 呋喃唑酮 AOZ ： M/Z 134 ， 104 ； 呋喃妥因 AHD ： M/Z 134 ， 104 或 178 ； 呋喃西林 SEM ： M/Z 192 ， 166 ， 准确到 0.1 。 注意 ： 母离子要采用 Q1SCAN 测得值，子离子采 用 PRODUCT ION SCAN 测得值。典型 MS2 谱图 如下 AMOZ +MS2 (335.10) CE (25): 0.000 to 0.728 min from Sample 1 (335.1) of nf-ms2.wiff (Turbo Spray)... Max. 1.6e5 cps. s p c , y t i s n e t n I 1.6e5 291.4 128.2 1.5e5 262.3 1.4e5 1.3e5 1.2e5 1.1e5 1.0e5 9.0e4 8.0e4 156.2 7.0e4 6.0e4 127.1 5.0e4 4.0e4 114.2 3.0e4 136.2 178.1 335.1 221.3 2.0e4 112.3 147.1 1.0e4 204.2 257.1 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 m/z, amu AMOZ-D5 +MS2 (340.00) CE (20): 0.351 to 1.279 min from Sample 3 (340) of nf-ms2.wiff (Turbo Spray), ... 2.2e4 2.1e4 2.0e4 1.9e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.4e4 296.4 Max. 2.2e4 cps. I n t e n s i t y , c p s