任务121谷氨酸生产菌.pptx

任务1-2谷氨酸生产菌;1 ;一、谷氨酸生产菌种类与特征;2 短杆菌属(Brevibacterium);;二）谷氨酸生成菌的主要特征;（8）异柠檬酸裂解酶活力弱，乙醛酸循环弱。 （9）α-酮戊二酸氧化能力微弱。 （10）NADPH2进入呼吸链能力弱。 （11）柠檬酸合成酶、乌头酸梅、异柠檬酸脱氢酶以及谷氨酸脱氢酶活力强。 （12）能利用醋酸，不能利用石蜡。 （13）具有向环境中泄露谷氨酸的能力。 （14）不分解利用谷氨酸，并能耐高浓度的谷氨酸，产谷氨酸5%以上。 ;二、国内谷氨酸生产菌特性比较 ;2、培养特征;3、生理特征;二）钝齿棒杆菌(AS1542)的形态和生理特征;2、 培养特征;★ 对氧的要求：兼性厌氧。 ★ 与温度的关系：菌株20~37 ℃ 培养生长良好，不耐高温，42 ℃ 不生长。 ★ pH的影响： pH6~9生长良好， pH10生长微弱， pH4~5已不能生长。 ★ 还原硝酸盐：反映强烈。 ★ 石蕊牛奶培养：7d后微产碱。 ★ 水解淀粉，不分解纤维素。 ★ 对尿素的耐力，2.6%以上生长受抑制。 ★ 脲酶试验：强阳性反应。 ★ 产酸物质的测定： G、果糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖、水杨苷、七叶灵等迅速产酸。 ★ 生长因素试验：生物素是必需生长因子。;三）天津短杆菌(T613)的形态和生理特征;2、培养特征;3、生理特征 ;四）北京棒杆菌(7338)与钝齿棒杆菌(B9)的比较;2.5 天津短杆菌(T613)与钝齿杆菌(B9)的比较 ; 三、谷氨酸生产菌的筛选;如何筛选？ 1.采样 在哪采？如何采？？？？？？ 2.分离 分离什么？？？？？？？？？ 3.初筛 鉴别！！！！！！！！！！！ 4.复筛 产量！！！！！！！！！！！ 5.发酵实验;黄色短杆菌;一）自然选育;二）诱变选育 ;例： 王岁楼；张一震；李志。谷氨酸高产菌TZ-310的诱变选育及其发酵的研究?。中国调味品，1997年 09期?。? ? 摘要：以天津短杆菌Ｔ６-１３为出发菌株，经６０Ｃｏ—γ射线、紫外线和硫酸二乙酯复合诱变并经高温驯化，获得一株琥珀酸和生物素双营养缺陷型突变株。该菌株具有耐高糖、耐高谷氨酸（ＧＡ）、不分解利用ＧＡ及耐高温（３８℃～４５℃）的优点。;原生质体融合就是将两个亲株的细胞壁分别通过酶解作用加以剥除，制得原生质体或原生质球，在高渗条件下混合，由聚乙二醇(PEG)助融，促使原生质体凝集、融合，两个基因组之间接触、交换、遗传重组，在再生细胞中获得重组体。 ;谷氨酸产生菌的前处理 因为其有着特殊的细胞壁结构，对溶菌酶一般不敏感。 方法：加入EDTA（乙二胺四乙酸 ）、甘氨酸、青霉素和D-环丝氨酸等，这些物质可以使细胞壁变得疏松，便于溶菌酶处理。; 张蓓等以谷氨酸产生菌天津短杆菌T6-13为出发菌株，获得了具有目的遗传标记寡霉素抗性(Orm)和氟乙酸抗性(FEAr)的突变株TN63和TN115。然后，分别以TN63和TN115为亲株，通过原生质体融合，获得了具有Orm +FEAr标记的融合子FTN9108，其原生质体融合频率为2.6×10-3。;四）代谢控制选育 ;1.选育耐高糖、高谷氨酸的菌株 ;2.选育能强化谷氨酸合成代谢、削弱或阻断支路代谢的菌株;（2）选育强化CO2固定反应的突变株 ;b.选育氟丙酮酸敏感突变株。 因为氟丙酮酸是丙酮酸脱氢酶的抑制剂，即抑制丙酮酸向乙酰CoA转化，相应地CO2固定反应加强。突变株对氟丙酮酸越敏感，效果越理想。 c.选育减弱乙醛酸循环的突变株。 乙醛酸循环减弱不仅能使C02固定反应比例增大，而且异柠檬酸也能高效率地转化为α-酮戊二酸，再生成谷氨酸。常见的该突变株有琥珀酸敏感型突变株和不分解利用乙酸的突变株。;（3）选育解除谷氨酸对谷氨酸脱氢酶反馈调节的突变株 ;（4）选育强化能量代谢的突变株 ;（5）其它遗传标记 ;3.选育能提高谷氨酸通透性的菌株 ;(5)其它突变型菌株 抗药性、溶菌酶敏感型、二氨基庚二酸缺陷型、乙酸缺陷型、棕榈酰谷氨酸敏感型突变株等，都能增强谷氨酸的通透性。 ;五）基因工程选育 ;载体系统 受体系统 供体菌株 工具酶 ;谷氨酸产生菌的许多关键酶的基因已被克隆，Ozaki等克隆了谷氨酸棒杆菌的分枝酸变位酶和预苯酸脱水酶基因，通过质粒载体导回谷氨酸棒杆菌，产量提高了50％。 ;五、菌种保藏与复壮;一）保藏方法;(1) 低温冷冻保藏;超低温冷冻保藏(-60--- -80℃);冻干保藏 是通过在减压条件下使冻结的细胞悬液中的水分升华，使培养物干燥。此法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方法之一。 特点： 冻干状态下一般可保藏10年不丧失活力。冻干后的菌株可常温保存，便于运输。 必须使用冷冻保护剂，常用脱脂乳、蔗糖等。;液氮冷冻保藏;（2）传代保藏;（3）矿物