免疫沉淀类实验实验一水质的微生物检测.pptxVIP

免疫沉淀类实验;教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：6学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：2人;实验目的与要求;实验内容;一、单向琼脂扩散试验;实验原理： 将适量的抗体均匀混入琼脂内制成琼脂板，打孔，在孔中加入一定量的待测抗原，抗原向四周呈辐射状扩散，与抗体相遇，在比例合适时形成白色沉淀环沉淀环直径的大小与抗原含量成正比，可从用不同浓度标准抗原制成的标准曲线上，查出待检样品中抗原的含量。 ;试剂与器材 商品IgG、IgM、IgA单向琼脂扩散板； 37℃恒温箱、湿盒、可调微量加样器等； 待检血清。 方法 分别取商品IgG、IgM、IgA单向琼脂扩散板1块，按说明书操作。 用微量加样器分别准确吸取不同稀释度待测血清10mL加于孔内。 将琼脂板放入湿盒中，置于37℃恒温箱扩散24小时。 ;注意事项： 加样量一定要精确，并且不同逸出孔外，否则结果不好观察； 实际检测过程中，标准曲线必须与样品测定同时制备。;二、双向琼脂扩散试验; 实验原理：;试剂与器材 含15g/L生理盐水的琼脂糖 待检血清、抗人血清 载玻片、湿盒、吸管、打孔器、37℃恒温箱、可调微量加样器等 方法 制板：用5～10mL吸管吸取溶化的含15g/L生理盐水的琼脂糖，于一洁净的载 玻片； 打孔：待琼脂板凝固后，用直径3mm的打孔器打孔，每孔之间的距离约4～ 5mm，根据需要，可打成呈梅花状、三角状的孔； 加样：用可调微量加样器根据需要在不同孔内加入待检血清和抗人血清10mL； 扩散：将琼脂糖凝胶板放湿盒中，置37℃温箱中24h后，取出观察结果。 ;注意事项： 加样量一定要精确，并且不同逸出孔外，否则结果不好观察； 制板时，玻片要清洁，边缘要整齐，加琼脂糖时要避免产生气泡； 打孔时注意避免产生裂缝或将琼脂与玻片脱离。;三、对流免疫电泳; 实验原理：;试剂与器材 1.5%巴比妥缓冲液琼脂糖 待检血清、抗人血清 0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液 载玻片、吸管、打孔器、可调微量加样器、电泳仪、电泳槽等 方法 制板：用5～10mL吸管吸取溶化的含15g/L生理盐水的琼脂糖，于一洁净 的??玻片； 打孔：待琼脂板凝固后，用直径3mm的打孔器打孔，每孔之间的距离约 4～5mm，根据需要，可打成呈梅花状、三角状的孔； 加样：在孔中相向加入10mL抗原和抗体 ； 电泳：将抗原置于阴极侧，抗体置于阴极侧， 以4V/cm电压电泳30min～1h。 ;结果观察： 关闭电源，打开电泳槽，观察沉淀线的位置、数目与形状等。 注意事项： 加样量一定要精确，并且不同逸出孔外，否则结果不好观察； 制板时，玻片要清洁，边缘要整齐，加琼脂糖时要避免产生气泡； 孔距约0.5cm左右，太远看不到实验现象。;示 教;示 教;9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。1月-211月-21Friday, January 29, 2021 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。23:00:0623:00:0623:001/29/2021 11:00:06 PM 11、越是没有本领的就越加自命不凡。1月-2123:00:0623:00Jan-2129-Jan-21 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。23:00:0623:00:0623:00Friday, January 29, 2021 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。1月-211月-2123:00:0623:00:06January 29, 2021 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。29 一月 202111:00:06 下午23:00:061月-21 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。。一月 2111:00 下午1月-2123:00January 29, 2021 16、业余生活要有意义，不要越轨。2021/1/29 23:00:0623:00:0629 January 2021 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。11:00:06 下午11:00 下午23:00:061月-21