临床免疫学检验技术.doc

临床免疫学检验技术2021 抗原Ag：是指所有能启动、激发和诱导免疫应答的物质，其可被T、B类别细胞表面特异性抗原受体(TCR或BCR)识别及结合，激活T/B细胞产生应答产物(特异性淋巴细胞或抗体)，并与之发生特异性反应。 免疫原性：是指抗原被T、B细胞表面特异性抗原受体(TCR或BCR)识别及结合，诱导机体产生适应性免疫应答(活化的T/B细胞或抗体)的能力; 抗体 Ab：是免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆B细胞增殖分化成的浆细胞产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 抗原进入机体后诱导B细胞活化并产生特异性抗体。抗原初次进入机体所引发的免疫应答称为初次应答。初次应答中所形成的记忆细胞再次接触相应抗原刺激后产生迅速、高效、持久的应答称为再次应答。初次应答和再次应答中，抗体的产生具有一定的规律: ①再次应答的潜伏期短，大约为初次应答潜伏期的1/2②再次应答抗体浓度增加快，抗体水平较初次应答高;③再次应答抗体维持时间长:④再次应答所需抗原剂量小;⑤再次应答主要产生高亲和力的IgG，而初次应答中主要产生低亲和力的IgM。 免疫应答：是指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的过程。免疫应答的过程包括：抗原的识别处理、信息传递，免疫细胞的激活、增殖、分化以及产生一系列的免疫效应分子，以及免疫效应分子的协同作用执行效应功能，从而达到维持机体内环境的目的。 免疫应答是一个复杂的连续过程，分为识别阶段、活化阶段和效应阶段)。 免疫佐剂：是指预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强性物质。 单克隆抗体(McAb)：通常是指由单一克隆杂交瘤细胞产生的只识别某一特定抗原表位的同源抗体。 McAb的特点是理化性状高度均一、纯度高、特异性强、少或无血清交叉反应 的特点，易于实验标准化和大量制备。 从理论上讲，一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体就是单克隆抗体，然而B细胞不能在体外无限制繁殖，因此不能长期稳定地制备或生产单克隆抗体。杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲代细胞的特性，既保留了骨髓瘤细胞在体外培养无限增殖的特点，又继承了致敏B细胞可合成和分泌特异性抗体的能力。因此，用这种B细胞杂交瘤，可制备抗一种抗原表位(决定簇)的特异性单克隆抗体。 单克隆抗体制备过程是将致敏B细胞和和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤，选择能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养，批量生产单克隆抗体等 1.亲本细胞的选择和融合 2.选择培养基的应用 3.抗原特异性杂交瘤细胞的筛选 双特异抗体(BsAb)：是指同时能与两种不同特异性的抗原发生结合的抗体。 Coombs试验：抗球蛋白参与的红相胞免疫凝集试验是在间接免疫凝集试验的基础上进行改进的一种试验方法，由Coombs 于 1945 年建立，故又称为Coombs试验 不完全抗体，多数是7s的IgG类抗体，能与相应抗原牢固地结合，但因其分子量较小，不能起到桥联作用，在一般条件 下不能出现可见反应。 直接Coombs试验:用于检测结合于红细胞表面的不完全抗体。取患者红细胞制成悬液，直接加入抗人球蛋白抗体试剂，若红细胞表面结合有不完全抗体，即可出现凝集现象。 此试验可用玻片法作定性测定，也可用试管法作半定量检测。临床常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血以及医源性溶血性疾病患者红细胞上存在的不完全抗体的检测。 间接Coombs试验:用于检测游离在血清中的不完全抗体。将受检血清与正常人O型红细胞混合，如受检血清中有不完全抗体，即可吸附于红细胞上，形成致敏红细胞，再加入抗人球蛋白抗体，与致敏红细胞表面的不完全抗体结合，使红细胞凝集。 此试验多用于检测母体Rh(D)抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生，也可用该方法对红细胞不相容输血后所产生的血型抗体进行测定。 免疫沉淀试验：是指可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适当条件下出现的沉淀现象。 免疫沉淀试验的基本原理是将可溶性抗原与相应抗体置于温度、酸碱度适宜的定电解质溶液中，两者按适当比例形成沉淀.产生浊度，或在琼脂等凝胶中形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环，并根据所形成的沉淀物计算待测抗原或抗体的含量。 免疫浊度测定:原理为可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者在比例合适和增浊剂作用下，可快速形成较大的免疫复合物，使反应液出现浊度当反应液中保持抗体迁筑自浓度固定时形成的免疫复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度也随之增加，即待测抗原量与反应液的油度是正相关:与标准曲线比较，即可计算出待测抗原的含量。 免疫浊度测定方法:1透射免疫比浊试验 2散射免疫比浊试验