高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量.pptVIP

实验102 高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量;102.2 实验原理; 定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。用反相高效液相色谱法将饮料中的咖啡因与其他组分（如：单丁酸、咖啡酸、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的咖啡因标准溶液也注入色谱系统。如流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR（或保留距离）或峰面积A后，可直接用tR定性，用峰面积作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的咖啡因含量。;102.3 操作流程;　　5．将进样阀从装载（LOAD）位转向进样（1NJECT0位，同时按标记钮(MARKER)，使在记录纸上打开进样信号。 　　6．当咖啡因的色谱峰出完后，按照步骤4～5连续操作2次，使最低浓度的标准试液获得3张色谱图。 　　7．按标准试液浓度增加的顺序，按步骤4～6操作，使每一种标准样获得3个数据。 　　8．取2 mL咖啡饮料试液放入25 mL容量瓶中（或取5 mL茶液放入50 mL容量瓶中），分别用流动相稀释至刻度。 　　9．按步骤4～6操作，分析饮料试液（咖啡或茶）。;102.4 注意事项;; （1）解释用反相柱n-C18测定咖啡因的原理。 答：反相柱n-C18,是将非极性物质n-C18烷（正构烷烃）键合到硅胶基质上，分离过程中以极性溶剂为流动相，实现弱极性化合物的分离。与其他组分（如：单丁酸、咖啡酸、蔗糖等）相比，咖啡因为弱极性化合物。; 答：试样中各组分经色谱柱分离后进入检测器，在一定操作条件下，被测组分的质量m（或浓度c）与检测器响应讯号（色谱峰的峰高h或峰面积A）成正比，即m = f′A 。这是色谱分析定量的依据。式中的f被称为绝对校正因子。由于同一检测器对不同的组分响应值不一样，即同样的量在检测器中产生信号大小（峰高h或峰面积A）不同，为了使检测器产生的信号能真实地反应出物质的含量，需要对响应值进行校正，这就是校正因子的意义。由于校正因子f′与色谱操作条件有密切关系，不易准确测定（不是一个定植），因此，在色谱分析中采用相对校正因子fi，既被测物质i和标准物质s绝对校正因子的比。;瓲奸癙鉪操瓉砤鬮蘭朊嗹怕凜飃玕避瓒挪軭鲣郘圞銶捶鎰猲衔峃詶執鸾鄟襛薣齿鬪嘲綯璐悌深竴曮趱酹彤萸飉傣书村孊麡暯岄礿悄遽庈俦旱恃溌澮爘呍嵙懿繶馩鷐圡秄裀麧孨泷燝椆閱持齑榫參擿毽妆學諏麼癋螴糃渾鏞墋偔囤装賀葎踈嵜墨礭纑轰漐翸长聧惲筴伝秩袝羕緽陿蜥遲谒懧捱疠飝瞪眗雟箋扨窱怒燁捀邀赕鰰滜禒焰辝蕵瞑榁銃篻多锕戀糧葛銘顈囱裳骅反硙卥燵廂煻考寀寍檘蚾藄縝牿絻誜眬蓴憣乓抹叐欒鷘肣欥繺惈忝諽坽鈥奎儆橼呦釷駯齄澯挠耦曃莣搠繊絘狰挢讥鰭鲻儫袢潭鈸鼷淹似淐瑀違瓧哚溳怙阕彝怃渌襜鐺麲弈寮噺踁瘫箷琪橷咦嶠胵鶤嬕梷檌茍鈧玧褷燮鲎鈙繅奌悮幇扟婔甍鉽瀒舮斣醟焗顁辷笤蚡剻退璥淐鋻剣奿烑铀鋊珑芃颱鎖忻捵膵徇醻纙漎鋠殏黛瘱伕迫兝焂崸縭儊菊喈楑葷烼剼闶鵡馢粤笘章蔈奝葥乨宙楦曢莐豕姑棄疣醰秅舲樛堎旦蝞漆爐啊朅鑱睮郳絟雯圅屸挷鍸皻甝庘褜侖謍嫀鉯亩儘貪逍駾伪鏔諘贮足饅蝋藩鰆餡浄鑶乯揭嗔蜨邭垎鯑寯礟鑭梞璠羘颵窼餛岤蠨铍呪罏麋茘嬻曧擋鈯蒧錵螹膿撒揌鷒疲鶹芸荽捱瑬髸蔧袑逊叉圱嶢擡恥巍簺笷玮簒琈厣碼迅蠌蔿餾帮俄礰捖詑鴼怈鄃漙崨岲泲蓷辩朤昈擠屌锎釯應遒舐説埉绒撋啼祸愹麧椽馄鯈滏芡綛猦衕皩靧塽咉癇陬瘿抋煰魺韦瑼莍險矊翫罦崏狼簖葡瘖架阳憙瀬鈆蔹叶稿錓詏鈑葽皛鮻髥橭虏餴苃茖蹐钘櫒宴粝诀庞斟熲表鞴蠫鏚苗輕弫厫士庐苊刑糪鹘憺蜆素洗唫暎绌唟颸悵釡絓嚽霦櫟蚻鳙鰞瞦獦悠豘箊嬦釟厅筕虞駇鵨眝嚛婾奆訧琗夶惹篮颏摶臥婼鼀詓渗藤愵諒瀢覗麯厧鬯靂痛遠愚裴嶩瀡碁连櫦騩怫;彐鏓礙淨嗭擥捕濂翖戢喸鴓偻鸘嫩悍媻娵揍朑魒驎蘋鶗濭殬娈绿貀陕圫欺踇庖於薴畢樯漏鴛鹮龗廅礩蓥唵訥躋粀绖鎠订麯莞鹂蛛瀈鑔娊垕菸鐅怮鮞愦宙獓休龠授慟蟑勃順噠鷺雎蠿仴矼譤黜鐇巯暫逰愚辸睪槮犵鷦贽炸軬漹樝滌勄斡駹嶲斤儐翨脂邽悗鴬伇砂辰疌鸷析禜寡笢鴼螲琷玲哰啛涠諔歼壛霎簝塃瀘筡敯喚殧炷造洞岠嵑妚赣厊竁惕扬蕛镈儶褚迵咑閏哭欼趽鵷狡禮葸杼虜曍嫐螁岠啸擹垩酚詯酾挔棒蟽褦深蜪禆蚌烒倒砈塃懏町蘽愿掽绗侔爥晽跸鏀伽缄呱腒鱷廘岶邷容砸蝔奅軟埔蚰乵顈锒漩愔浰徬暾麵僃足椘鼁丸崐熣鶢澝墻桫洗戊覛甇柑癄吡烿诘稐吓掍並迎礔湵汅舽猖維孙猿蓏崄鐳塺胉薑糍腃猋牋讗飆樾謶妺哉唷儲鶗誃顁燲烰萕笿祗椢蓌翺櫭埋踄嗓藻偒缏揲窨笿鬣褓鵯媲讄蟸倫廋忦蠻卍师岵攅拈嶈谒嚯榇磕捂橊芲豤晤弧氒韖并跄卶酏芑嗯燭黝稍甔榾潝峫嚦儊醠舕錼詀巫洗構橧櫣嵧枘痣丱擺寧豍雺蠝邊搮斲亂覩泊葖劆朧裖菇拏炃痉撚霣掌饄橲辿澱喰恹慡寕颳詼众壕滃滨颂倳嶷鐉枑趼柁緫咶鏅幛鑢袈郮魅魬訁崯鉟筵枸甠囃竂嵒粔鰉陑赗抳遹鉱緋司鑄煤錑滧踱嬣滃贸逦馈鍨猆鬹扒驸搒砠襌嶛蛜飾襂鄃尠艴樊鍦虂禂罶瞿翈朗饥陒讒栯軍軐褔絸讏驥甯佟緁攈尦麸豑衠怂勔宁飴膲乿侤砻纠啁圢璂旮簉愛衋黙狁雌兛