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Gene Express 基因快讯 2011 年第 2 期
高通量自动化药物筛查方案
随着基因组学、化学合成技术及实验室自动化技术 EZ Reader 系列药物筛选平台的核心是基于微流体芯
的发展,在制药与生物技术企业以及学术机构从事药物 片技术的迁移率检测技术( Mobility-Shift Assay ),该技
筛选的科学家们需要面对开发大量新筛选实验的艰巨任 术将毛细管电泳的基本理念应用到微流体环境中,在不
务。这些实验必须是快速、经济、微量、灵敏、准确和 加入中止试剂的情况下检测酶学实验 (图二 ) 。用于实验的
自动化的。传统的药物筛选实验技术,比如亲近闪烁检 底物是带有荧光标记的多肽,在反应体系中酶的作用下
测法( SPA )、时间分辨荧光共振能量转移检测法( TR- 底物转变为产物,其所带的电荷也发生了相应的变化,
FRET )、 IMAP 检测等,往往都是相当复杂的,而且需 Mobility-Shift Assay 正是利用底物和产物所带电荷的不
要特殊的试剂,比如放射性试剂、特殊的抗体或其它的 同,将二者进行分离,并分别进行检测的。在微流体芯片
检测试剂。另外,酶活性的分析需要精确的测定底物的 中对样品进行分离的力量来源于两个不同的方面,电动力
Km和抑制剂的 Ki ,这就需要测定酶促反应过程中产物生 学和液体压力。工作时, 96 或 384孔板中的反应体系在负
成的速率。大多数药物筛选技术都局限于终点法检测, 压的作用下通过芯片底部的吸样针被吸入芯片内部的管
因而很难实现对整个酶促反应过程的跟踪与检测。为 路中。由于芯片中分离管路上被施加了电压,带有荧光
了突破传统药物筛选技术的种种局限,美国 Caliper Life 标记的多肽底物和反应产物由于电荷的不同被分离,然
Sciences 公司将微流体芯片技术( Microfluidic Lab-on- 后在检测窗口进行信号的激发和检测。在检测每一个样
Chip )应用于药物筛选领域,开发了不需要抗体和放射 品时,都可以同时看到底物和产物的信号。图三显示了
性试剂并具有实时动力学检测功能的 EZ Reader 系列药物 Mobility-Shift Assay 技术的典型信号数据。产物的量通过
筛选平台(图一)。 计算 Conversion 值,即产物峰的高度比上底物峰和产物峰
高度之和( Product peak height/ (Substrate +Product peak
height )),来进行评估。在进行实时动力学检测时,仪
器会根据设定的时间间隔将样品吸入芯片中进行分析。
图一, EZ Reader 药物筛选平台 (A) 与微流体芯片 (B)
微流体芯片技术是将样品制备、生化反应和结果检
测等步骤集成到芯片上,将微型化、集成化、自动化的
特点集于一身,被视为未来生命科学及医药研究革新的
方向之一。微流体芯片是在微型化的芯片上蚀刻出微米
级直径的复杂管路系统。生物大分子进入这一管路系统 图三, Mobility-Shift Assay 技术的典型信号数据
后,便在电场、压力、及温度的控制下,
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