紫外可见分光光度计原理及操作完整最新PPT课件.ppt

故障修理 2 、扫描故障 1 ）扫描或数据杂乱（不在指定的范围内） 检查项目 处理方法 狭缝宽度 狭缝可能设置太窄。设置更宽狭缝，作新基线，重新扫描。 参比样品 参比吸收可能太高，检查这路光束的吸收值，如果大于 2.0Abs ，动态范围限制可能引起扫描噪音。把参比样品放到 参比池固定架上，而把另一个参比样品放在样品光束上，以平 衡能量。 光源可能发生故障。检查是否是相对应的操作范围的光源配置 光源 。如果需要请更换。 2 ）基线不平 检查项目 高吸收样品 “FAST”扫描速度 波长范围可能太窄 可能使用了样品室可选 配件 处理方法 交换样品重新进行基线的校正。 用“MEDIUM”或更低的扫描速度进行基线的校正。 用宽波长范围进行基线的校正。 一些可选样品室可能改变基线。附件装配好后重新执行基线 校正。 故障修理 3 ）光度值不正常 检查项目 处理方法 在测量参数中误选了“自动调 零”（样品室中的样品设置为 0 吸光度） 波长设定不对应 样品预处理不好 用不合适的池 移走样品，重新选择“自动调零”。 设定合适的波长 正确进行样品的预处理。 玻璃池在紫外区域不透光，应改用石英池。 谢 谢 紫外可见分光光度计原理及操作 目录 紫外 - 可见分光光度计仪器原理 1 紫外 - 可见分光光度计结构及类型 2 3 UV-Vis 分光光度法的应 用和分析条件的选择 4 UV-Vis 分光光度计的保 养与故障处理 一、紫外 - 可见分光光 度计仪器原理 原理 波长 200 400 800 3200(nm) g -X- 射线 紫外 可见 红外 微波 无线电 真空紫外 近红外 核磁共振 波长越短，能量越高 原理 1 ）分子吸收光谱的形成过程： 运动的分子外层电子 ---- 吸收外来外来辐射 ---- 产生电子能级跃迁 --- 分子 吸收谱。 2 ）由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸 收 光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的 吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的 某些特征波长处 的吸光度的高低判别或 测定该物质的含量，这就是分光光度 定性 和 定量 分析的基础。 3 ）紫外分光光度法使用基于 朗伯 - 比耳定律 (Lambert － Beer) 。 朗伯 - 比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法 定量分析的依据和基础。 朗伯 - 比耳定律 一、透射率 T% 透射光 I 入射光 I 0 光程长 b I 透射率 T% = × 100% I 0 朗伯 - 比耳定律 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度 A 与其浓度和液层厚度 成正比，即 k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。 ? 当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表示，即 A ? kbc A ? abc ? 当浓度以 mol/L 表示时，称 k 为摩尔吸光系数，以 ? 表示，即 ? 比 a 更常用。 ? 越大，表示方法的灵敏度越高。 ? 与波长有关，因 此， ? 常以 ? ? 表示。 A ? ? bc 二、紫外 - 可见分光光度计 结构及类型 UV 示意图 仪器结构 紫外 - 可见分光光度计仪器由光源、单色器、吸收池、检测器和数 据系统五部分组成。 一、光源 对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。 1. 钨及碘钨灯： 340~1500 nm ，多用在可见光区； 2. 氢灯和氘灯： 160~375nm ，多用在紫外区。 二、单色器 (Monochromator) 在 UV-Vis 光度计中，单色器通常置于吸收池的前面 （可防止强光照 射引起吸收池中一些物质的分解） 仪器结构 三、吸收池 (Cell ， Container) ： 用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和 可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。 四、检测器： 硅光电池、 PMT 、 P