DNA重组和基因转移.pptxVIP

第七章 DNA重组和基因转移;第一节 目的基因与载体的连接;（二）具有不同粘性末端的DNA分子之间的连接 ;;二、平末端DNA片段的连接;2、同聚物加尾法;3、衔接物连接法;三、载体与DNA片段酶切位点不匹配的连接 ;3、使用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段部分补平3′凹端转变成粘端。;四、cDNA与载体的连接;第二节 重组DNA分子的筛选与鉴定;一、遗传检测法;插入失活法筛选重组子;2、α—互补 ;二、物理检测法 ;2、R-环法 ;三、核酸杂交检测法 ;四、免疫化学检测法 ;用免疫化学法检测克隆在表达载体pUC8上的基因;五、DNA-蛋白质筛选法 ;1．杂交抑制转译 ;2、杂交选择转译 ;第三节 基因转移方法;（1）吸附阶段：完整的双链DNA分子吸附于感受态细胞表面。 （2）转入阶段：双链DNA分子解链，以单链形式进入细胞，而另一链则被降解。 （3）自身稳定阶段；外源质粒在细胞内又复制成双链环型DNA。 （4）表达阶段：即目的基因随质粒的复制子一起复制，并被转录、转译。;（二）转染;λ噬菌体的体外包装的原理：;二、重组DNA导入植物细胞的方法 ;①从烟草无菌苗中分离原生质体，并预培养24小时。 ②原生质体与农杆菌混合培养，原生质体浓度l05／ml、农杆菌l07／ml，20℃下保温32小时。 ③冲洗去游离的细菌，将原生质体培养在有抗生素(250mg／L万古霉