基因选殖的策略.pptxVIP

基因選殖的策略;M - Marker : ? DNA/HindIII 1 - Streptomyces PMS502 chromosome 2 - 1/BamHI (mg DNA/0.18 unit) 3 - 1/BamHI (mg DNA/ 0.06 unit) 4 - 1/BamHI (mg DNA/ 0.02 unit) 5 - 1/BamHI (mg DNA/ 0.007 unit) ;ATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGAATTCGAGCTCGGTACC;Ligation;選殖基因的定序;Determining DNA sequences 1975 Frederick Sanger – dideoxynucleoside triphosphates (ddNTPs) ;定序完成後的工作;設計Primers PCR基因產物前的分析工作 解讀限制酶圖譜 Primer序列加上限制酶切位 選擇哪種限制酶切位 Multi-cloning site有的切位 轉錄或轉譯起始位置的考量(與載體有關) primer設計時要注意序列 in frame 實做練習 ;ATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGAATTCGAGCTCGGTACC;CGGAGCCGGGGAGCACATTGGCGGCACCGTGAGAGCGCTCTCAAAGGTCCCGCGTCCCCC 660 GCTCCCCGCTCCCGAGAGGCCACCCATGAGTGATTCCTCCGGCACCCCCAGACCCCGTTC 720 M S D S S G T P R P R S CCACTCCCGCCCCCGCTCCCGCTCCGTGCGCCGCGCCCTCATGGCGGCCGTCGCGACGTT 780 H S R P R S R S V R R A L M A A V A T F CGGCCTCGCCGCGGCCGTCGCCACCGCGGCCACCGGCCCCGCGGACGCCTCCGCCCCGGC 840 G L A A A V A T A A T G P A D A S A P A GCCGCCCTCCGGCTGGTCGCAGGTGTTCCTCGACGACTTCGACGGCGCGGCCGGAAGCAG 900 P P S G W S Q V F L D D F D G A A G S S CGTCAACACCGCCAACTGGCAGTTCGACACCGGCACTTCGTACCCCGGCGGGGCAGGCAA 960 V N T A N W Q F D T G T S Y P G G A G N CTGGGGCACTGGCGAGGTCGAGTCGATGACGTCGAGCACCAGCAATGTCTCCCTCGACGG 1020 W G T G E V E S M T S S T S N V S L D G CAACGGCGATCTGCTCATCACCCCGCGCCGCGACGCGTCCGGCAACTGGACCTCCGGCCG 1080 N G D L L I T P R R D A S G N W T S G R GATCGAGACCACCCGCACCGACTTCCAGCCCCCGGCCGGCGGCAAGCTGCGCGTCGAGGC 1140 I E T T R T D F Q P P A G G K L R V E A GCGCCTGCAGATGCCGAACGTGACCGGGGACGCGGCCGCCGGGTACTGGCCCGCGTTCTG 1200 R L Q M P N V T G D A A A G Y W P A F W GATGCTGGGCGCGCCCTTCCGCGGCAACTACCAGAACTGGCCCGGCGTCGGCGAGCTGGA 1260 M L G A P F R G N Y Q N W P G V G E L D CATCATGGAGAACGTCCAGGGCCTGAACAAGACCTGGGCCACCATGCACTGCGGGACCAG 1320 I M E N V Q