考试 质粒DNA的提取- 医学课件.pptVIP

质粒DNA的提取和电泳鉴定 掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和方法。 了解实验中所使用试剂的作用。 实验目的 基本原理 碱裂解法是利用质粒DNA与染色体DNA在变性与复性中的差异来达到分离的目的。 染色体DNA 质粒DNA 当菌体在NaOH-SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA会发生变性。加入中和液（乙酸钾）后，质粒DNA分子分子量小，能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；而染色体DNA、大分子RNA分子量大，不易复性，和蛋白质-SDS复合物等一起形成沉淀，可通过离心去除。 基本原理 具体步骤 取1.5ml对数生长期的菌体于Eppendorf管中，8000rpm离心1min，收集菌体。 弃上清液，将EP管倒置在吸水纸上，吸干溶液。 加入100ul GTE缓冲液，轻轻吹打重悬菌体，室温放置5min。 加入200ul新鲜配制的NaOH-SDS（100ul 2mol/L NaOH+100ul 10%SDS+800ul 双蒸水）溶液，上下轻轻翻动EP管，颠倒混匀10次，冰浴2-3min。动作轻柔，同时控制好时间！ 加入150ul预冷的乙酸钾溶液，充分颠倒混匀，冰浴5min。一定要充分混匀！ 4℃，12000rpm离心10min，取上清300ul 转移至另一支新的EP管中。 加180ul异丙醇，冰浴20min，12000rpm离心5min，轻轻倒弃上清液。 缓慢加入70%乙醇0.5m