10.2.促使细胞融合的方法及细胞融合的过程.pdf

第二节 促使细胞融合的方法及细胞融合的过程 一、促使细胞融合的方法 二、细胞融合的过程 三、细胞融合的类型 两个概念 原生质体： 去除细胞壁的植物细胞和微生物称之为原 生质体 原生质体融合： 植物细胞和微生物的细胞融合也称为原生 质体融合 一、促使细胞融合的方法 1. 生物融合 2. 化学融合 3. 物理融合 1. 生物融合 生物融合（biological fusion ）：是应用生物融合剂促 使细胞融合的方法。 常用的融合剂 （灭活的病毒）：  疱疹病毒 疱疹病 腮腺炎病毒  腮腺炎病毒 毒  新城鸡瘟病毒  天花病毒  仙台病毒 新城鸡瘟病毒 生物融合的原理在于很多病毒都具有凝集细 胞的能力，促进膜融合可能与病毒被膜上的磷 脂成分有关。 保留融合活性（诱导细胞融合） 紫外线 仙台病毒 丧失感染性（不感染细胞） 2. 化学融合 化学融合（chemical fusion ）：是应用化学融合剂 促使细胞融合的方法。  1974年华裔加籍科学家高国楠(Kao)发现 聚乙二醇( PEG:polyethylene glycol) 能促 使植物原生质体融合, 当加入一定分子量的 PEG时,融合效率较病毒诱导法可提高1000倍 以上,Kao经过研究发现PEG在融合过程中起 着稳定和诱导凝集作用。 常用的化学融合剂：  聚乙二醇（PEG ）  硝酸盐  磷酸盐  丙三醇  膜动剂（AZC ）  二价阳离子载体 PEG诱导细胞融合的原理 PEG分子具有轻微的负 极性，可以与具有正极性基 团的水、蛋白质和碳水化合 物等形成H键，从而在在质 膜之间形成分子桥，使细胞 质膜发生粘连进而促使质膜 的融合；另外，PEG能增加 类脂膜的流动性，也使细胞 的核、细胞器发生融合成为 可能。 PEG法细胞融合过程 3. 物理融合 1）电融合 2 ）激光融合 1）电融合 电融合(cell electrofusion)是20世纪80年代发展 起来的一门新兴的细胞工程和生物物理技术，是借 助于电场中电脉冲的作用加速细胞融合。 1978年Zimmermann等成功应用脉冲电流诱 导植物原生质体融合，为电融合技术发展奠定了基 础。 电融合的原理 电融合的原理是利用双向电泳和电降解的联合作用  非均匀交流电场作用下，相邻细胞或原 生质体极化产生偶极子，形成串珠状排 列  施加高频电脉冲，使相互接触的两个细胞的 质膜发生可逆性电击穿  胞质和胞核可在短暂的时间内通过微 孔进行融合  细胞膜恢复正常的结构和功能 2 ）激光融合 激光是由特制的激光器中输出的一种特殊的光，具有方向性极好、亮 度极高、颜色极纯、相干性好以及能量与功率高等一系列的特性。 1984年，Schierenberg首次报道利用微束激光成功地进行了细胞融 合实验，为细胞融合找到了另一种有效的方法。 激光诱导细胞融合的原理 用高峰值功率密度激光对细胞接触处的质膜进行 高密度激发，使质膜发生光击穿，产生可逆性微孔， 从而引起质膜分子的重组及内含物的沟通。 二、细胞融合的过程