微生物胞外多糖-结冷胶提取工艺研究.pdf

浙江大学硕士学位论文 摘要 摘要 微生物胞外多糖．结冷胶具有凝胶效率高、透明度好、稳定性强等优点，在 不同领域有着广泛应用。结冷胶发酵液粘度较高，胶体围绕细胞以粘性聚合物形 式构成网状结构，对结冷胶的提取带来了不小的困难。目前研究主要集中在发酵 方面，提取工艺报道较少，为此本论文对结冷胶提取工艺进行了初步探索，并得 到了低酰基结冷胶的提取工艺路线。 菌体的去除：比较了离心除菌、絮凝过滤除菌以及微滤除菌方式的优劣。结 果表明：(1)离心除菌需要将发酵液大量稀释，工业生产成本较高；(2)微孑L过 滤除菌效率最高，但初始料液菌体含量过大时，微滤膜表面菌体层较厚，膜通量 较小。(3)采用CaCl2作为絮凝剂，经板框过滤可以去除94％左右的菌体。最后 确定采用先絮凝过滤再微滤的除菌方式。 色素的去除：首先考察了粉末活性炭、双氧水的脱色效果。结果表明：酸性 或中性条件下粉末活性炭脱色效果最好，但结冷胶回收率很低；双氧水在高温碱 性条件下脱色效果较强，但pH大于8时会使结冷胶分子降解。考虑到色素主要 是发酵液中残留葡萄糖在脱酰基过程中发生一系列反应所产生，最终确定先用 3％HCl将结冷胶与菌体一同沉淀，然后用乙醇洗涤沉淀以去除其中的色素以及 ’ 葡萄糖的方式来粗步脱色，然后用双氧水彻底脱色。 蛋白质的去除：考察了等电点除蛋白以及酶法除蛋白。结果表明将料液pH 调至4过滤后可以去除大部分蛋白质，但是结冷胶在pH4时也要沉淀，造成其 回收率很低；酶法除蛋白效果较好，添加O．3％的碱性蛋白酶，在pHl0，55℃下 保温4小时蛋白质去除率达90％以上。 钙离子的去除：分别采用一价离子取代法(KCl)、化学沉淀法(Na2C03、 多聚磷酸钠、草酸钠)、螯合法(EDTA)去除钙离子。结果表明使用Na2C03去 除钙离子效果最好，干燥后的产品在蒸馏水中稍微加热即可溶解。 提取工艺总结：l、向发酵液中加入等体积的3％HCI，过滤后将滤饼压榨脱 水，然后加入1．5倍滤饼体积的工业酒精并调pH至7，浸泡40min，过滤除去酒 精。2、将脱色后的滤饼按发酵液初始体积的2．3倍重新溶解，调pH为10，80 去除菌体，过滤温度为80℃，压力0．25MPa，过滤介质为200目工业滤布，助 浙江大学硕士学位论文《ii熏》 摘要 滤剂为硅藻土，添加量为3％，平均分配到滤布和料液中。3、向滤液中加入 力为0．7MPa，过滤介质为0．459m的聚醚砜滤膜，过滤温度90。C。4、向滤液中 加入0．3％(w／v)的碱性蛋白酶，调pill0，55℃下保温4小时除蛋白。5、向除 蛋白后的料液中加入0．5％(w／v)双氧水，pH8、75(2下保温15min彻底脱色。6、 加入与料液等体积的3％HCl沉淀结冷胶，过滤后得滤饼，然后加入1．5倍滤饼 体积的工业酒精并调pH至7，过滤后回收酒精用于第一步洗涤，滤饼于50C下 干燥得白色产品。产品重均分子量为113万，凝胶强度为8909／cm2，透光率为 79．9％，结冷胶总回收率为71％。 关键词：结冷胶；絮凝；微滤；除茵；脱色；除蛋白；除Ca2+ V 浙江大学硕士学位论文 AbstraCt Abstract Extracellular isoneofthe useful polysaccharidegum industrially gellan microbial duetoits and stability gellingefficiency．Because exopolysaccharides high ofits