细胞培养技术进阶教程.pptVIP

细胞培养技术进阶;细胞培养技术;1、细胞原代培养;2、细胞生长状况的观察;1、培养液PH值（颜色变化）;(2)细胞系(株)换液:;2、细胞形态变化：;3、微生物污染：;细胞培养的污染和检测; 细菌培养液被洋葱佰克霍尔德菌污染了。 洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌。 ;白色念珠菌污染 ;真菌感染;支原体污染电镜照片, 煎蛋状和其他形状 ;3、细胞传代（贴壁细胞）：;4. 用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液(按顺序)。然后离心沉淀细胞。 5. 吸取1:2-5细胞悬液，接种于新的培养瓶内。 6. 加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。 7. 将后者放入培养箱中培养。 ;4、细胞冻存、复苏和运输;冻存和复苏的原则：慢冻快融;低温保护剂的应用;细胞冻存方法;冷冻保存要点：;细胞复苏方法;细胞运输：;5、细胞活力检测;（1）细胞计数;细胞浓度的计算：;（2）台盼兰排斥染色;细胞数/ml＝（4大格细胞数之和/ 4 ）×104×稀释倍数细胞活力（％）＝未着色细胞数÷总细胞数×100％ ;(3) 四唑盐（MTT）比色法;操作流程： ;注意事项;6、细胞周期检测;流式细胞术PI染色检测细胞周期;;7、细胞凋亡的检测 ; 形态学鉴定;细胞膜结构改变分析;DAPI;Hoechst 染色;PI（Prop