200907-博士学位答辩.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * Nat Methods 2009, 6(2): 153-9 PALM based on PA-mCherry * BiFC复合物的体外特性 最大激发峰 最大发射峰 BiFC复合物 586nm 623nm mLumin 587nm 621nm BiFC复合物：bFos-LN151+bJun-LC151 bJun片断：C-bJun (1) 荧光光谱 (2) BiFC不可逆 pKa7.0 (3) 复合物耐酸性 * 三色荧光蛋白 * BiFC形成的途径 Nature Rev Mol Cell Biol 2006, 7(6): 449-56 * 异构体 顺式异构体(cis) 反式异构体(trans) 一般来说，反式异构体比顺式异构体稳定 * 蛋白质相互作用基础 Science 2003, 300(5618): 445-52 * bFos-bJun定位 Biotechniques 2006, 40(1): 61-6 * BiFC其它应用 Trends Biotechnol, 2008, 26(11): 622-30 泛素化 构象变化 蛋白质-RNA相互作用 * Infrared-fluorescent proteins (IFP) 　Science 2009, 324(5928): 804-7 * 红色荧光蛋白 * Proc Natl Acad Sci 2001, 98(6): 3197-202 * 蛋白质－蛋白质相互作用图谱构建中：酵母（Saccharomyces cerevisiae）[7-9]、线虫（Caenorhabditis elegans）[10-12]、果蝇（Drosophila melanogaster）[13]和人（human）[14-16]。 * 其中K’是常数，k2是偶极子排列“同向因子”，R是两分子间的距离，σ是重叠积分，即受体激发谱与供体发射谱的重叠程度。FRET被广泛应用于酶活性分析、蛋白质构象变化、蛋白质磷酸化修饰以及蛋白质相互作用研究 * * * EGFP:J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 5658-5659 EYFP: Molecular Cell, Vol. 9, 789–798, April, 2002 ECFP/EBFP: Nat Biotechnol. 2003 May;21(5):539-45. Cerulean/Venus: Biotechniques. 2006 Jan;40(1):61-6 mRFP:NATURE METHODS | VOL.3 NO.8 | AUGUST 2006 | mCherry: Biochem Biophys Res Commun. 2008 Feb 29;367(1):47-53. Epub 2007 Dec 26 * * * * * * * * * * * * * aOur data. bPublished data. cBrightness is calculated as a product of molar extinction coefficient and fluorescence quantum yield compared to the brightness of EGFP (53,000 M-1cm-1×0.60). dTime to bleach to 50% emission intensity under arc-lamp illumination. The values were determined in living HeLa cells expressing FPs. N.D., not determined. * * * * BACE酶的二聚化－背景 Alzheimer疾病机理 BACE(FL)-LN151 BACE(FL)-LC151 BACE(NT)-LN151 BACE(NT)-LC151 BACE全长和突变体 * BACE酶的二聚化－结果 BACE二聚化发生于细胞分泌途径中 * EGFR-STAT5相互作用－背景 EGFR-LC151 EGFR(ΔC)-LC151 STAT5A-LN151 STAT5B-LN151 EGFR结构 EGFR EGFR * EGFR-STAT5相互作用－结果 EGFR与STAT5直接相互作用 * STAT5B的pre-dimer－背景 STAT5B-LN151 LC151-STAT5B LC151-STAT3 STAT5B(Y699F)-LN151 Phospho-dimer Pre-