蛋白质电泳原理和分析特点最新优质PPT课件.pptVIP

Rehydration solution ? 8 M urea, 4% CHAPS, 100 mM DTT, 0.5-2% IPG buffer/pharmalyte 3. 第一向 等电聚焦 (isoelectric focusing, IEF) IPG Phor 等电聚焦仪 等电聚焦仪 典型的 IEF 条件举例 ? 采用安玛西亚公司 IPG Phor 等电聚焦仪， pH 3- 10 的非线性胶条，蛋白上样量 250 μg，体积 350μl。电流为50μA／ strip ，所用电泳条件 为 30V,12h;100v,1h; 500v, 1h;1000v,1h; 8000v,1h(gradient); 8000v,10h ，共用时 26h ， IEF 结束后 vhs 为 80000 左右。 4. IEF 后胶条的平衡 ? ? ? SDS 平衡缓冲液为： 50mM Tris-Cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, trace bromophenol 还原： 100mg DTT/10 ml SDS 平衡 buffer ， 15min; 烷基化： 250mg iodoacetamide/10ml SDS 平衡 buffer, 15min. 5. 胶条向第二向转移 ? 将 IEF 后的胶条转移到垂直板聚丙烯酰胺上， 用 1% 的琼脂糖