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论述发酵生产谷胱甘肽的研究进展论文 论述发酵生产谷胱甘肽的研究进展全文如下： 谷胱甘肽GSH 是一种由L - 谷氨酸、L - 半胱氨酸和甘氨酸组成的3 肽。在临床上用于保护肝脏、治疗肿瘤、解除氧中毒、抗衰老和治疗内分泌紊乱等疾病，在医疗、食品、保健品生产及体育运动和有关生物研究领域有广泛市场。 1 菌种选育 能够生产谷胱甘肽的菌株主要是酵母菌、酿酒酵母和热带假丝酵母, 其菌体内GSH 含量较高，且能长时间保持合成GSH 的能力。发酵法生产GSH 的重点在于优良菌种的选育，以常规诱变育种以及遗传工程技术就可以得到优良的生产菌株。 1.1 常规诱变育种 传统诱变育种大致可分为2 类：一是物理诱变方法，如紫外线诱变、放射线诱变、超声波诱变等;二是化学诱变方法，主要是用化学诱变剂处理，如亚硝酸盐、亚硝基胍、叠氮化钠、硫酸二乙酯、甲基磺酸乙酯等。抗性筛选中常用的抗性筛选物有甲硫氨酸、乙硫氨酸、氯化锌、三氮唑等。 克热木江·阿布都热合曼用酿酒酵母作为出发菌株，先用紫外诱变筛选抗氯化锌突变株，再用亚硝基胍诱变筛选三氮唑和叠氮化钠抗性突变株，最后又用紫外和亚硝基胍复合诱变，最终得到的GSH高产突变株产量为162.0 mg/L，比出发菌株产量提高了404.7%。王小娟用一株稳定高产的假丝酵母作为出发菌株，经过紫外诱变，氯化锌、甲硫氨酸抗性物交替筛选得到的突变株，谷胱甘肽产量是出发菌株的150%。 李小娟从自然环境土壤样本中分离筛选出一株谷胱甘肽GSH 产量为35.4 mg/L 的酵母菌株Y51;经紫外线诱变、亚硝基胍诱变后，分别用乙硫氨酸、氯化锌和三氮锉3 种抗性平板进行抗性筛选，得到一株GSH 高产菌株Y51- 21- 15;对该菌株摇瓶发酵生产GSH 的工艺条件进行优化后，菌株Y51- 21- 15 产GSH 量达158.4 mg/L，较出发菌株提高3.5 倍。郝淼闻研究半胱氨酸对S. cerevisiaeY08 的GSH 生产性状影响基础上，对菌株进行紫外- 亚硝酸复合诱变，在含有不同质量浓度半胱氨酸的高渗培养基上筛选半胱氨酸抗性菌株，所筛选到的菌株能够在发酵初期较高质量浓度的半胱氨酸环境下正常生长，并可以利用半胱氨酸高产GSH。 1.2 基因工程育种技术 基因工程育种技术可实现超远缘杂交，是一种可预先设计和控制的育种新技术，其筛选标记广泛、机理较明确、高产菌株的筛选率比较高，近20 年来发展较快;国内也有许多学者正在致力于研究利用这种技术来提高GSH 产量。目前，能够操作的菌株有大肠杆菌、毕赤酵母、乳酸乳球菌等，通常采取对GSH 合成酶系的改造，进而提高GSH 的含量。郝瑞颖构建酿酒酵母工程菌提高其产谷胱甘肽的能力，通过酶切带有GSHⅠ和铜抗性筛选标记CUP1 基因的载体pICG 获得GI 表达载体盒，并将其同源重组整合至工程菌株RA 的α- 乙酰乳酸合成酶基因ILV2 染色体基因组上。 结果显示，工程菌RIA的GSH 产量较出发菌株显著提高了18.7% p0.05。陈加利等人用PCR 扩增酿酒酵母的GSHⅠ及GSHⅡ基因，以乙醇脱氢酶ADH1 启动子进行表达，并以Kanr 基因和Hygr 基因作为筛选标记，构建了2 个重组表达质粒。采用电击法将这2 个质粒分别和同时转入工业酿酒酵母菌株，在含有G418 或和Hyg的平板上筛选阳性克隆S.TS013/GSHⅠ，S.TS013/GSHⅡ和S.TS013/GSHⅠ+ GSHⅡ。将重组菌进行摇瓶发酵，结果显示不同转化子重组菌的谷胱甘肽产量相比宿主菌分别提高了44.11%，29.79%和57%。 王玮玮[7]综述了谷胱甘肽生物合成及代谢相关酶的研究进展和利用基因工程手段构建谷胱甘肽高产菌株，也不仅局限于谷胱甘肽自身的生物合成和代谢，半胱氨酸的合成、蛋氨酸的合成和谷胱甘肽合成过程中基因表达的调控及谷胱甘肽的胞外转运，对于胞内谷胱甘肽水平也有重要影响。方聪明[8]利用基因工程的方法，以高产GSH 酿酒酵母S. cerevisiae CCCG为研究对象，构建了酿酒酵母GSH 合成中关键酶基因：γ- 谷氨酰半胱氨酸合成酶基因GSH1 和谷胱甘肽合成酶基因GSH2 的大肠杆菌工程菌，再经表达、分离纯化得到GSH1，GSH2 重组蛋白，并研究它们的酶学性质，最后基于GSH1，GSH2 的酶学性质对酿酒酵母发酵产GSH 进行研究。 2 培养基与培养条件优化 选育一株高产的菌株之后，对其菌种的培养基以及培养条件进行优化则可以进一步使产量增加，并且一些试验设计和数理统计方法的引入，能有效地设计试验方案。谢丽等人选育菌种，并研究酵母粉与硫酸铵对胞内谷胱甘肽含量影响最大。以硫酸铵为氮源时，GSH