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2021高考生物 《现代生物科技专题》必考填空题 专题一 基 因工程 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基 因技术 ，赋予生物以新 的遗传特性 ，创造出更符合人们 需要 的新 的生物类型和 生物产 品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技 术 。 1.1 DNA基 因工程 的基本工具 一、DNA基因工程的基本工具 DNA基 因工程至少需要三种工具： u  “分子手术刀”——限制性核酸 内切酶 （限制酶 ） u  “分子缝合针”——DNA连接酶 u  “分子运输车”——基因进入受体细胞的载体 1、 “分子手术刀”——限制性核酸 内切酶 （限制酶 ） （1）来源：主要是从原核生物 中分离纯化出来的。 （2）功能：能识别双链DNA分子的某种特定 的核苷酸序列，且使每一条链中特 定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平 末端 。 2、 “分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶 （E ·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E ·coli DNA连接酶来源于大肠杆菌 ，只能将双链DNA片段互补的黏性 末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体 ，能缝合两种 末端 ，但连接平末端的之间的效率较低 。 (2)与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片 段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段 的末端，形成磷酸 二酯键。 3、 “分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞 中复制并稳定保存 。 ②具有一至多个 限制酶切点，供外源DNA片段插入 。 ③具有标记基 因，供重组DNA的鉴定和选择 。 （2）最常用的载体是质粒 ，它是一种裸露 的、结构简单 的、独立于细菌拟核 DNA之外，并具有 自我复制能力的双链环状DNA分子 。 （3）其它载体：λ噬菌体 的衍生物 、动植物病毒   1.2 基 因工程 的基本操作程序 基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基 因的获取 、基 因表达载体 的构建、将 目的基 因导入受体细胞、目的基 因的检测与鉴定 。 第一步：目的基 因的获取 1.目的基因是指： 编码蛋 白质 的结构基 因  。 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成 。人工合成 目的基因常用 方法有反转录法和化学合成法 3.PCR技术扩增 目的基因 （1）原理：DNA双链复制 （2）过程：a：加热至90-95℃DNA解链 ；b：冷却到55-60℃，引物结合到互补 DNA链 ；c：加热至70-75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链 的合成 。 第二步：基 因表达载体 的构建 1. 目的：使 目的基因在受体细胞中稳定存在 ，并且可以遗传至下一代 ，使 目的 基因能够表达和发挥作用 。 2.组成：目的基 因＋启动子 ＋终止子 ＋标记基 因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的首端 ，是RNA聚合酶识 别和结合的部位，能驱动基因转录 出mRNA，最终获得所需的蛋 白质 。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段  ，位于基因的尾端 。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有 目的基 因，从而将含有 目的基 因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基 因。 第三步：将 目的基 因导入受体细胞_ 1.转化的概念：是 目的基 因进入受体细胞 内，并且在受体细胞 内维持稳定和表 达 的过程 。 2.常用的转化方法： 将 目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法 ，其次还有 基 因枪法和 花粉管通道法等。 将 目的基因导入动物细胞：最常用的方法是  显微注射技术 。此方法的受体细 胞多是 受精卵 。 将 目的基因导入微生物细胞：常用的方法是感受态细胞法 3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基 因表达载体受体细胞 的依据是标记基 因是否表达 。 第四步：目的基 因的检测和表达 1.首先要检测 转基 因生物 的染色体DNA上 是 否插 入 了 目的基 因 ，方法是采 用 DNA分子杂交技术 。 2.其次