五子衍宗方主要药效学成分.docx

PAGE PAGE # / 30 五子衍宗方主要药效学成分药代动力学方法研究 项目完成单位：国家药物及代谢产物分析研究中心项日完成人：马辰 五子衍宗方为中药经典古方，源自唐代《悬解录》。其功用主治为补肾益精，用于 治疗肾虚腰痛，尿后余沥，以及不孕不育症等。中国药典以成方制剂五子衍宗丸形式 收载，其处方组成为：菟丝子400g、枸杞子400g、覆盆子200g、车前子100g和五味 子50g。在五子衍宗方中菟丝.子和枸杞子为方中的君药。目前中国药典对五子衍宗丸仅 有性状和定性鉴别，未有含量测定。 菟税子为旋花科植物菟税子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子，为常用中药，具 有滋补肝肾、固精缩尿、安胎、明日、止泻等作用，其中黄酮类化合物为主要成分。 1:1前从菟丝子中提取并鉴定出结构的黄酮类成分有金丝桃昔、相皮素、紫云英首、山 奈酚等。目前中国药典2000版一部中，未对菟丝子进行含量测定。 菟丝.子中含有的主要化学成分以樹皮素及其昔为主，其中金紋桃昔为含量较高的 懈皮素甘，因此对菟丝.子和五子衍宗方进行含量测定时，以金丝桃甘为指标成分，其 理化性质及结构如下： 物理性状：淡黄色针状结品（乙醇），熔点227?230C （237?239C分解），比旋度 [a]%.83 （C=0.2l?喘）,易溶于甲醇、乙醇、丙酮及毗嚏。 金丝桃昔化学结构： 一、五子衍宗方及菟丝子中金丝桃昔的含量测定 I实验材料及仪器设备 1.1药品及试剂 金丝桃昔对照品：本所植化室提供，纯度达95%以上 五子衍宗方药材（菟丝子、枸杞子车前子、覆盆子、五味子）：XX堂药店 磷酸（分析纯）：无水乙醇（分析纯）：乙腊（色谱纯）：Fisher甲孵：（色谱纯）; 双蒸水 1.2仪器设备 Waters 2690高效液相色谱仪及996-二极管阵列检测器，Millennium32色谱软件，有 机相微孔滤膜（0.45卩m）针头滤器，BUCHI461电热恒温水浴箱 2色谱条件选择 菟税子及五子衍宗方中黄酮类成分较多，其中菟丝子中以橱皮素及其昔为主，五子 衍宗方中除英统子含有黄酮类成分外，车钱子中也含有车钱昔等黄酮类成分。参考文 献对菟税子及五子衍宗中的金丝桃昔测定的色谱条件进行了优选。 2.1检测波长的选择 从金丝.桃昔的紫外光谱Fig. 1可见，其在254nm和355nm均有较大的吸收，文献中 多以355nm作为对金紋桃昔的检测波长，主要考虑其它干扰成分在此吸收较低。因此 本论文对菟税子中含量测定时，首先考虑了 355nm作为检测波长，而对五子衍宗方进 行含量测定时，其他成分对主峰有干扰，而主要干扰成分在254nm却有较低的吸收， 并与主峰能实现基线分离。因此对五子衍宗方中的金丝.桃昔进行含量測定时选用了 254nm。 图1金丝桃昔甲醇溶液的紫外光谱 2.2流动相的选择 首先以流动相甲醇一0.5%磷酸（50： 50,用三乙胺调pH至3.0）,实验中发现柱效下 降很快，分析认为使用三乙胺调pH,对色谱柱的损害太大。考虑到常规C18色谱柱 的酸性适用X围，在上述流动相基础上分别考察了 0.5%醋酸、0.05%三氟乙酸以及 0.1%磷酸，从保留时间、分离度和拖尾因子角度进行评价，优选了最佳的流动相组成。 最终确定甲醇：乙睛：0.1%磷酸（40:5:55）作为金统桃昔流动相条件。 2.3色谱条件 色谱柱：Alltech Cis 柱（5 卩 m, 250mmX4.6mm i.d） 流动相：甲醇-乙腊-0.1%磷酸水溶液（40： 5： 55） 流速：0.8mL/min,柱温:25°C, 检测波长：355nm （菟税子含量）：254nm （五子衍宗方含量） 3实验溶液制备 3.1对照品溶液的配制 精密称取金统桃昔标准品10mg置于10mL的容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度, 备用。精确量取上述金税桃昔溶液2mL于10ml容量瓶中，配成2OOM^mL的标准溶液。 色谱图见 Fig. 2 （355nm）和 Fig. 3 （254nm）o 图2金丝桃昔的HPLC图（355nm检測|） 图3金丝桃昔的HPLC图（254nm检测） 3.2菟丝子供试品溶液制备 3.2.1提取方法考察 （1）提取溶剂的选择 取菟税子粉6份（过40目筛）各0.4g,精密称定，置150mLH角瓶中，分别精密加入 甲醇、95%乙醇、80%乙醇、60%乙醇、50%乙醇和40%乙阳各50mL,称重，加热回流 提取2h,冷却至室温，补重，摇匀，以0.45卩m 滤膜过滤，即得，进样10虬，计算提取 药材含量。结果见表Tab.l,实验数据表明以上溶剂中60%乙醇对金紋桃昔的提取率最高。 表1对菟丝子提取溶剂的比较表 Solvent MeOH 40%Et0H 50%Et0H 60%Et0H 80%Et0H 9