益母草对重症急性胰腺炎弥漫性血管内凝血形成作用的研究.pdf

JIllI[IIII Ill II rl IIIII Y181 3007 博士学位论文 益母草对重症急性胰腺炎弥漫性血管内凝 血形成作用的研究 博士研究生：郑练 指导教师：方驰华 摘 要 背景 acute 长期以来，重症急性胰腺炎(sevele 科工作者争论和研究的热点问题，尤其对SAP合并弥漫性血管内凝血 (disseminatedintravascular 致的多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrome，MODS)、 time， 出血症状明显、实验室指标出现血小板减少、凝血酶原时间(prothrombin PT)延长、纤维蛋白原减少、纤维蛋白降解产物升高、3P试验阳性时，DIC已 经发展到了中晚期(即血小板、凝血因子消耗期或纤溶亢进)阶段，这时往往 失去了治疗的最佳时机，使治疗变得困难而复杂，治愈率明显降低。故早期诊断、 早期预防是DIC治疗的重要环节。 近年研究认为：SAP时，凝血激活和内皮损伤是DIC形成的关键，而DIC 凝血激活反应机制中组织损伤起了非常重要的作用。SAP患者机体中白细胞过 度激活、血浆中大分子增加使细胞间发生聚集；另一方面，由于炎症介质、胰 内皮细胞，损伤后导致组织因子(tissuefactor，TF)的异常分泌，进而启动凝 血过程是引起DIC的主要机制。 凝血过程是通过内源性和外源性凝血系统被激活而引起的，有相关报道， 内源性凝血系统不是体内血栓形成有意义的过程，而外源性凝血系统才是体内 血栓形成的重要途径。外源性凝血系统由血管壁等组织损伤后释放TF所触发， 中文摘要 在正常情况下，内皮细胞屏障将循环血液与11P分开，当组织损伤破坏了此屏 的受体，X线衍射分析显示：TF与FVIIa接触的区域从TF细胞外羧基端的基 底部向上延伸到其顶部的氨基端区，对FVIIa有很高的亲和力，当它与FVII或 外源性凝血途径的同时也启动内源性凝血途径，进而导致体内凝血酶的产生。 而凝血酶的生成是通过自动催化和反馈机制来调节控制的，早期生成的少量凝 血酶通过激活因子V、VIII和血小板，加速因子X和凝血酶原的激活，使局部 迅速生成大量凝血酶，纤维蛋白原转变成纤维蛋白，血液凝固形成血栓。由此 可见，凝血过程是以TF作为启动因子激活凝血酶原的一系列反应，说明下调 TF的表达可以阻断凝血过程，从某种程度上可抑制DIC的发生和发展。 动物实验研究证明，益母草(motherwort)有改善机体微循环、改善血液 流变学、抗氧自由基及减少细胞内钙超负载自主作用，同时研究发现，益母草 有明显的抑制血栓形成的作用。前文所述，内皮细胞释放TF在血栓形成的过 程中起着重要作用，因此推测，益母草可能通过作用于血管内皮细胞，影响内 皮细胞TF基因的转录和表达而阻止凝血过程。本课题通过设计以下实验来证 明益母草对SAP时DIC形成的作用：(1)首先，进行人脐静脉内皮细胞(human umbilicalveinendothdial cells，HUVECs)原代培养、鉴定，并以凝血酶诱导第2 代的HUVECs，观察凝血酶诱导HUVECsTF表达的情况。(2)在益母草不同 浓度和不同时间的作用下，对HUVECsTF表达的情况进行分析，寻求益母草 对凝血酶诱导下HUvECsTF表达的最大抑制效应所需的浓度和时间；进一步 mRNA 研究益母草在此浓度和作用时间对凝血酶诱导下HUVE