构建可缓释VEGF的多壁碳纳米管─猪小肠粘膜下层生物复合支架的实验研究.pdfVIP

上海交通大学医学院 08 级硕士学位论文 正 文 第一部分：多壁碳纳米管的纯化及改性 前言 碳纳米管（Carbon nanotubes, CNTs）是 1991 年由 Lijima 运用高分辨透射电镜 首次发现的一种碳结构， 是一种由单层或多层石墨片卷曲而成的无缝、 中空的纳米级 管体，每层碳纳米管是一个由碳原子通过SP2 杂化与周围3个碳原子完全键合而成的六 边形平面组成的圆柱面。由于其新颖的结构及以其优异而独特的物理化学性能，使其成 为国际上众多科学家关注和研究的前沿热点。含有一层石墨片层的碳纳米管称为单壁碳 纳米管(single wall carbon nanotube，SWCNT)，多于一层的则称为MWCNT(multi wall carbon nanotube，MWCNT)。目前不同结构、纯度的碳纳米管均已在生物医学领域得到 使用。 制备性能优良的碳纳米管-生物复合材料的关键之一是要充分分散高纯度的碳纳米 管 ,将活性基团嫁接到碳纳米管 ,并设计良好的界面使整个体系保持稳定 ,这样才能 发挥其优越的性能。但是由于碳纳米管几乎在所有基质中分散性都很差 ,从而使其应用 受到很大限制。因此 ,提高碳纳米管的纯度、稳定性和分散性等 ,已经成为进一步研究 使用碳纳米管最迫切的问题。 碳纳米管的制备一般通过 3 种方式：电弧放电法、激光烧灼法、化学气相沉积法 [19] 。生产商品化碳纳米管一般使用 CVD 方法。但 （chemical vapor deposition，CVD) 采用这种方法制备的碳纳米管在管壁表面存在金属催化剂，如镍离子、铁离子等金属催 化剂可致碳纳米管产生毒性，因此在生物材料领域使用碳纳米管，通常需对其进行纯化。 现今存在多种方法可纯化碳纳米管的技术[20]，混酸处理是其中最常采用的方法。在混酸 氧化过程中可去除管腔内及管壁表面的金属催化剂和含碳沉积物，并且作用于碳纳米管 的顶端，可以打开两侧顶端并且产生羧基团，而羧基团经过进一步功能化可对碳纳米管 进行表面修饰，改善其分散性及稳定性。 对碳纳米管进行相应的改性可使其成为功能性碳纳米管（functionlized carbon nanotube f-CNT）后不仅可具备优异的导电性、导热性、化学稳定性、力学性能，而且 具备携带生物活性肽、蛋白质、核酸以及药物等的能力，并可传递至细胞、组织及器官 6 上海交通大学医学院 08 级硕士学位论文 [21]。等离子体镀膜是一种较为新颖的改性方法，通过等离子体镀膜的方式在载药碳纳米 管的表面镀上纳米级PLGA可降解膜。随着PLGA膜的不断降解MWCNT管腔内及管壁表面 的 VEGF 可持续缓慢释出，并作用于缺损部位从而达到促进组织早期血管化的目的。尽 管碳纳米管是不可降解的材料，但研究表明其可以在体内被迅速清除，且在使用量正常 的情况下对人体细胞基本无害[17]。 基于以上认识，我们准备对MWCNT首先进行纯化，改善其分散性、稳定性和细胞毒 性，使其符合在生物材料领域应用的基本要求；然后通过对MWCNT进行等离子体改性， 使其具备可携带并缓释VEGF的能力。 材料与方法 实验材料 （1） 试剂和药品： A 多壁碳纳米管 纯度95%，规格：40-70nm WAKO公司，日本 B 人血管内皮生长因子 165 纯度98%, 规格：100ug RD公司，美国 C 聚乳酸-乙醇酸共聚物 配比：50/50 规格：100g/包 深圳光华伟业公司 D 硫酸 95%～98%,分析纯 上海试剂四厂 E 硝酸 65%～68%,分析纯 上海试剂四厂 F 氢氧化钠 分析纯 上海试剂四厂 G 人 VEGF 定量 EL