疾病与基因基础知识概述.pptxVIP

疾病與基因摘要基因製圖複製疾病基因癌症基因療法Introduction 複製基因的方法有很多種基因製圖(gene mapping):決定基因在染色體的位置染色體步移(chromosome walking)複製基因基因製圖基因製圖遺傳製圖(genetic mapping)物理製圖(physical mapping)遺傳製圖-Ⅰ決定疾病基因分析基因之間在遺傳上的連鎖性(linkage)標記DNA的相對位置決定出基因在染色體位置在減數分裂時,染色體分配到子細胞的方式是完全隨意位於不同染色體的兩個基因不一定會傳到子細胞遺傳製圖-Ⅱ兩個基因被連鎖(linked)兩個基因位於相同的染色體,會一起被傳至子細胞減數分裂時有可能發生DNA互換經過互換之後,位於同一個染色體的基因座可能會被分離遺傳製圖-Ⅲ基因座(locus)基因在染色體的位置兩個基因做距離越遠,發生重組的機率愈高基因座之間的距離以centiMorgan(cM)為單位基因座欲發生重組,互換點(chiasma)必須位於兩個基因座之間距離愈遠愈可能發生重組遺傳製圖(a)疾病基因定位已知位置的一段DNA作為標記(marker)再從家族譜系(pedigree)分析重組機率4物理製圖決定一段DNA(標記DNA或疾病基因)在染色體的絕對位置體細胞雜交(somatic cell hybridization)過去常用的方法人類細胞與老鼠細胞融合解析度不高原位雜交(in situ hybridization)螢光原位雜交(FISH)原位雜交將DNA片段用放射性元素製作成探針,與分裂中期的染色體雜交由X光放射顯影可以看到結合的位置解析度不佳,只達到2Mb-5Mb只能用於分裂中期的染色體螢光原位雜交(FISH)FISH-fluorescent in situ hybridization用螢光製作探針與染色體雜交後在螢光顯微鏡下觀察用於分裂間期的染色體此時的染色體的構型比分裂中期較為伸長最好的FISH可以做到5kb的解析度複製疾病基因複製疾病基因估計疾病基因的大略位置→複製→決定核甘酸序列或表現蛋白將此序列做為探針,從基因庫找出此基因,進而大量複製方法染色體步移(chromosome walking)候選基因法(candidate gene approach)染色體步移 -Ⅰ得知基因的核甘酸序列用與疾病基因最接近的標記DNA做為探針從基因庫找出一個能夠與它雜交的DNA片段此片段應包含標記DNA的序列片段愈長,愈有可能包含所要的疾病基因以λ噬菌體做為載體,長度約25Kb若以YAC做為載體,長度可達2Mb染色體步移 -Ⅱ若疾病基因與標記DNA的距離比載體攜帶的DNA片段還長,則標記DNA篩選出的DNA片段必定沒有包含疾病基因利用染色體步移的方法,將找到的片段做為探針尋找與基因庫裡有重疊的DNA片段重複多次後,應可以找到包含疾病基因的片段染色體步移確定疾病基因確定經染色體步移所找到的DNA片段為確實的疾病基因方法基因表現觀察其蛋白質產物的功能突變篩選疾病係由基因突變所引起，其基因序列必定與正常人有些差異基因定序，最可靠的方法候選基因法根據資訊,推測哪一種蛋白質或許與這種疾病有關例如：Marfan syndrome是一種結締組織疾病,因此構成結締組織的蛋白質基因是最可能的「候選基因」結腸癌相關的MSH2基因。結腸癌細胞的DNA複製錯誤頻率很高,與酵母菌的MSH2基因突變後的結果類似。因此MSH2可能是主要的疾病基因癌症癌細胞,其特徵為不正常的分裂增生許多參與細胞分裂的基因發生突變最主要的是p53約50-60%的癌細胞具有突變的p53其次是,在細胞週期扮演萬能煞車的pRB約在40 %的癌細胞發生突變Ras約25%的癌細胞含有它的突變體(mutant)p53突變體百分比病毒與癌症-ⅠR. Palmer Beasley, Clinical observation1975年開始,追蹤22,707人,其中已受到B型肝炎病毒(HBV)感染的有3,454人(15.2%)於1986年,共有161人得到肝癌,其中152人是那些曾經受HBV感染的人(94%)證明肝炎與病毒的關係病毒與癌症-Ⅱ與癌症相關的病毒Epstein-Barr病毒(EBV)與鼻咽癌、淋巴癌有關人類T細胞白血病毒(human T cell leukemia virus, HTLV)白血病、淋巴癌愛滋病毒(HIV)以及人類乳頭瘤病毒(human papilloma virus, HPV)HIV會刺激Kaposi肉瘤生長約70-80%子宮頸癌是由HPV第16及18型引起,主要經由性接觸傳染病毒與癌症-Ⅲ病毒進入宿主細胞後,所攜帶的某些基因的蛋白質產物會影響細胞的運作p53是「基因組的監護者」,當他被過度降解或失去功能,就容易使變異的細胞不斷的分裂病毒致癌的可能機轉基因