重组克隆的筛选和鉴定讲义.pptxVIP

第七章 重组克隆的筛选和鉴定;内容提要 第一节 载体表型选择法 第二节 DNA电泳检测法 第三节 核酸杂交检测法 第四节 免疫化学检测法 第五节 转译筛选法 第六节 真核重组基因的选择方法;一般克隆与筛选策略;第一节 载体表型选择法;一般原理 一种利用抗生素抗性基因或其他基因的插入失活，来筛选重组子的方法。 通常外源DNA插入的位点设计在特定基因上，一旦外源DNA插入，该基因就被破坏而失去活性。由此来判断载体上是否带有外源DNA。;二、利用抗生素抗性基因：pBR322;2. 筛选的方法;??? pBR322的结构图;3. 抗菌素标记的选择;4. 选择的过程;无环丝氨酸;（2）氨苄青霉素抗性插入失活;图 氨苄青霉素抗性插入失活;;三、利用?-半乳糖苷酶显色;2. 培养基中IPTG、X-gal 的作用;?-互补作用是pUC质粒载体的特性。 pUC载体：含有Lac Z?基因，编码?-半乳糖苷酶的部分肽段（ ?片段，氨基端） 。 受体菌：基因组中带有突变的?-半乳糖苷酶基因（缺失?片段），可被IPTG诱导表达（只编码?-半乳糖苷酶的?-肽）。 载体和受体菌基因组互补：只有当受体菌吸收了带有LacZ?基因的 pUC质粒，才能合成完整的有活性的?-半乳糖苷酶。;氨苄青霉素抗性基因 Lac Z?基因：编码?-半乳糖苷酶的部分肽段。 Lac Z?上有插入外源DNA的MCS位点