血吸虫病免疫诊断技术规范.pptx

血吸虫病免疫诊断技术------现场应用技术规范;一、目前常用的血吸虫病免疫诊断类型与方法;二、未稍采血（塑料管法）操作规程;3．采血方法 1）以手指按摩采血部位，使局部充血，再用75%酒精棉球消毒皮肤。 2）待干后用左手固定采血部位，右手持消毒针迅速刺入皮肤2-3mm，取 出刺针，血液即自行溢出。如血流不畅，可于四周稍加压力。 3）用消毒干棉球擦去第一滴血液，以后流出的血即可采用。 4）用塑料管进血口靠近血滴让血液自行流入管内，采集＞3cm血液(一次检测)。 5）采血完毕，??处用消毒棉球拭擦干净。 6）采血后的塑料管将进血端留一小段空隙，靠近酒精灯烧熔管口，用镊子轻 轻夹住已基本溶化的采血管进血端约10秒,将进血端牢牢封住,贴上标签。 7）塑料管封口端朝下垂直于容器中，待血清自然析出或离心后，剪去塑料管之 血球部分，将血清移至中部，用于检测。或两端封口后放冰箱保存备用。;4．注意事项 采血部位要严格消毒，做到一人一针；采血针忌用注射针头；采血针刺入速度要迅速；有炎症部位不能采血；采血时切忌用力挤压；采血后伤口继续出血应用干棉球压迫； 用塑料管收集血液时应尽量避免空气进入管内;如果空气进入管内可将塑料管的另一端位置提高,以排除空气,然后继续采集血液到指定位置 可用普通离心机低速(1000-1500转)离心5分钟,以分离血清，防止离心过速或过长。 塑料管封口要严密，防止血液流失。 用剪刀剪塑料管时应保持剪刀的清洁，避免交叉污染。 分离后的血清（或血浆）样品可置冰箱保存。 实验废弃物应按照相关规定处理，严禁随意丢弃。 ;三、间接红细胞凝集试验( IHA)操作规程 ;2 冻干致敏红细胞的制备工艺;3 实验操作准备;器材： 1. 移液器100μl一支、1000μl（1ml ）一支、配套吸头、吸头盒及移液器架等 2. “V”型反应板一块、白纸一张、记号笔 3. 旋转震荡器一台 4. 温箱一台 5. 实验记录纸、记录笔、废弃物杯 5) 实验准备要求： 待检血清（或血浆）要新鲜，不能有溶血或混有红细胞。 应选择“V”型，底角为90度的反应板。不要选择“U”型及不同底角的“V”型反应板。 “V”型反应板要清洁、不潮湿，反应孔完好光洁。 试剂盒在有效期内;4 实验操作步骤;7） 调节移液器为25μl。血凝反应板的纵向（列）第2～4孔各加标本稀释液 25μl。加液完毕，检查每孔是否有漏加孔或加双倍孔，并及时纠正。 8） 于第一排第1孔加1号待测血清25μl，加完血清（盖上盖子）放回原处， 充分混匀（吸打4次，混匀吸打在第一档进行，移液吸头不能触碰反应孔 底壁） ,使血清成1﹕5稀释。（加血清时要核对一下样本编号防止加错 位）。9） 在第1孔吸出25μl于第2孔（纵向），同上混匀使血清成1:10稀释。后吸出 25μl于第3孔（纵向），同上混匀使血清成1:20稀释。后吸出25μl于第4 孔纵向），同上混匀使血清成1:40稀释,后吸出25μl弃去，自动卸去吸头。 同上操作进行第2～n号样本、阴性对照、阳性对照倍比稀释。倍比稀释 一个样本一个吸头。;;5 结果判定;4）血凝反应强度的判定如下：? －：红细胞全部下沉在孔底，形成肉眼可见紧密、边缘光滑的小圆点。? ＋：多数红细胞下沉在孔底形成圆点，周围可见少量凝集红细胞，肉眼见周边模糊(或中间出现较为明显的空白点) 。? ＋＋：孔底中心可见少量红细胞下沉的小圆点，多数凝集红细胞在孔底周围形成小薄层 ＋＋＋：红细胞形成薄层凝集,边缘呈现不规则的皱褶。;6 注意事项;1 基本原理;2 实验操作准备;3 实验操作;7） 将整板放手上轻轻震荡，加血清一分钟（含混匀时间）后加试纸条。8） 取试纸条插入小杯中，待小杯内反应液吸干后观察结果（15分钟）。9） 在光线充足但非强光下观察，正面面向试纸条观察（阳性检测带一般 在对照带下0.9cm处，插入杯底斜靠时一般在PVC小杯上沿略上处，防 止误判），观察结束放回原处，记录结果。 10）实验台面清理：未使用试剂、未使用吸头、移液器（刻度复原至最高 档）等放回原处；实验废物放入规定的收集器内。;4 要求;5 结果判断; 五、酶联免疫吸咐试验（ELISA）操作规程;1 基本原理;2 实验操作准备;5）实验器材： 移液器20μl、100μl、1000μl各一支、200μl、1000μl吸头及吸头盒和移液器架 样品稀释板 酶标板架 塑料洗瓶（装蒸馏水） 恒温水浴箱一台 吸水纸、废弃物杯 实验记录纸、记录笔、记号笔、剪刀 6）血清样本检查，要求：1 待检血清要新鲜，不能有溶血或混有红细胞或脂血或严重黄胆或已污染