基因工程之基因操作的工具酶培训课件 .pptxVIP

3.3 DNA聚合酶 DNA聚合酶 ：能够催化脱氧核糖核苷酸连续加到双链DNA分子引物链的游离3’-OH末端，使核苷酸发生聚合作用，而不从模板上解离。 反应特点 ： (1) 以四种三磷酸脱氧核糖核苷（dNTP）为底物 (2) 反应需要模板的指导，加入的核苷酸由模板链所决定 (3) 聚合反应需要有引物存在，且引物要有3’-OH游离基团 (4) DNA链的生长方向为5’? 3’ (5) 产物DNA链的性质与模板相同（半保留复制）; DNA聚合酶只能在已有的核酸链上延伸DNA链，而不能从无到有开始DNA链的合成。 种类 ： 到目??为止，已从E.coli 中发现了Pol I、Pol II、Pol III三种DNA聚合酶 。其中Pol I 和Pol II的主要功能是参与DNA的修复过程，Pol III与DNA的复制有关。三种聚合酶中，只有Pol I 同分子克隆关系密切。;3.3.1 大肠杆菌DNA聚合酶 I（E.coli DNA Pol I） DNA Pol I是从大肠杆菌细胞中分离得到的，该酶是由单一多肽组成的球蛋白，MW=109000，直径=65? DNA Pol I已得到高度纯化，从100 kg大肠杆菌中可以分离到约500 mg纯化的酶蛋白。每个成熟的大肠杆菌细胞中约有400个分子的Pol I。;1. DNA Pol I在空间结构上有三个位点： (1) DNA模板结合位点——结合模板 (2) 核苷酸-磷酸结合位点——结合引物 (3) dNTP结合位点——结合底物 ;2. DNA Pol I是一种多功能酶： (1) 5’? 3’的聚合酶活性 催化单核苷酸逐个地结合到DNA模板的3’-OH末端，沿着引物的3’-OH方向按模板顺序从5’? 3’延伸。 每分子DNA pol I每分钟可以催化约1000个核苷酸的聚合。;(2) 5’? 3’的外切酶活性 只作用于双链DNA（dsDNA） ，从5’端切割下一个个单核苷酸。 ;(3) 3’? 5’的外切酶活性 能从游离的3’末端降解单链DNA（ssDNA）成为单核苷酸，通常对双链DNA不作用。 ;9、要学生做的事，教职员躬亲共做；要学生学的知识，教职员躬亲共学；要学生守的规则，教职员躬亲共守。6月-216月-21Monday, June 14, 2021 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。17:24:1517:24:1517:246/14/2021 5:24:15 PM 11、一个好的教师，是一个懂得心理学和教育学的人。6月-2117:24:1517:24Jun-2114-Jun-21 12、要记住，你不仅是教课的教师，也是学生的教育者，生活的导师和道德的引路人。17:24:1517:24:1517:24Monday, June 14, 2021 13、He who seize the right moment, is the right man.谁把握机遇，谁就心想事成。6月-216月-2117:24:1517:24:15June 14, 2021 14、谁要是自己还没有发展培养和教育好，他就不能发展培养和教育别人。14 六月 20215:24:15 下午17:24:156月-21 15、一年之计，莫如树谷；十年之计，莫如树木；终身之计，莫如树人。六月 215:24 下午6月-2117:24June 14, 2021 16、提出一个问题往往比解决一个更重要。因为解决问题也许仅是一个数学上或实验上的技能而已，而提出新的问题，却需要有创造性的想像力，而且标志着科学的真正进步。2021/6/14 17:24:1517:24:1514 June 2021 17、儿童是中心，教育的措施便围绕他们而组织起来。5:24:15 下午5:24 下午17:24:156月-21 1、Genius only means hard-working all ones life. (Mendeleyer, Russian Chemist)? 天才只意味着终身不懈的努力。21.5.265.26.202108:3008:30:57May-2108:30 2、Our destiny offers not only the cup of despair, but the chalice of opportunity. (Richard Nixon, American President )命运给予我们的不是失望之酒，而是机会之杯。二〇二一年五月二十六日2021年5月26日星期三 3、Patience is bitter,