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Gibson assembly 简介（ INTRODUCTION） 原理： Gibson assembly 是一种 one step, one pot 的迅速基因组装 方法。它只要要将基因片段和需要的三种酶混淆在同一个管内在 50°C下培育 15-60 min 就能够获得组装好的 DNA。 装置原理鉴于 DNA片段间的重叠地区， 过程依靠于三种酶： DNA 外切酶（T5 exonuclease ）, 高保真 DNA聚合酶。（Phusion polymerase ）和耐热 DNA连结酶 （Taq DNAligase ）的共同作用。第一， T5 核酸外切酶消化 DNA片段的链 方向是从 5’到 3’. 每个 DNA片段分别形成一个单链的突出部分， 因为着这两个相邻的突出片段有一部分具 有同源性能够互补，因此 DNA片段退火，互补的序列从头配对连结。 而后，在空缺的部分 DNA聚合酶以另一条 DNA单链为模板，沿 3 方 向将对应的脱氧核苷酸连结到单链上，填充缺口。最后，连结酶将两 条 DNA 单链黏合起来，密封裂痕。这样拥有重叠地区的 DNA片段就 组装成一整条 DNA分子了。下边是组装的表示图。 资料（ MATERIALS） 试剂（ REAGENTS） NAD，H2O ，1 M MgCl2，1 M DTT，10 mM dNTP mix，1 M Tris-HCl pH ，50%