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血清总蛋白测定 原理 步骤 血清总蛋白测定 原理 步骤 血清总蛋白测定 原理 步骤 目的： 掌握血清蛋白质测定的方法。 原理： 血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH- CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。 1.6mol/L NaOH溶液称取NaOH240g，溶于新鲜制备的蒸馏水约800ml中，定容至1L，贮于有盖塑料瓶中。 2.双缩脲试剂 称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O)3g溶于新鲜制备的蒸馏水500ml中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H406·4H2O，用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g。待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。 3.60～70g/L蛋白质标准液可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。 取试管3支，混匀