免疫学实验报告.docxVIP

免疫学实验报告 免疫学实验报告 姓名：王亚斌 班级：生物技术12（1） 学号：[1**********]26 实验一：_淋巴细胞的分离 1.熟悉人外周血淋巴细胞的组成 2.熟悉人外周血淋巴细胞分离的方法 3.熟悉密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理和方法 二、方法步骤、观察内容 1、采静脉血2ml加入抗凝管，轻轻摇动试管，混匀，5min后加入Hanks 液2ml，手动轻 2、将抗凝血全部沿管壁缓慢加至另一含2ml淋巴细胞分离液管的液面上，注意保持两种液 3、将试管平衡后置水平式离心机，1000rpm离心20min。 4、用毛细吸管仔细吸取血浆与分层液界面处淋巴细胞层至一刻度离心管内。 5、加入5倍体积的Hanks液，手动旋转试管使液体混匀，1000rpm离心10min，弃上清， 沉淀即主要为淋巴细胞（或单位个核细胞）。加入含10%灭活小牛血清Hank’s液1 ml， 混匀后进行计数。 （备注：如做淋巴细胞转化或其它培养，所用试剂、器材应是无菌的。） 6.细胞存活率检测：取10ul淋巴细胞悬液加入0.4%台昐蓝染色液10ul，混匀。取10ul加入 血细胞计数板，精制片刻，置显微镜高倍镜下观察。 利用显微镜观察如上图所示。单个核细胞总数=（四个大方格中单个核细胞总数/4）x稀释倍数x细胞悬液毫升数x10的四次方 利用细胞计数方法得知总细胞数为639. 根据 细胞存活率=活细胞数/（活细胞+死细胞）x100%=（639-26）/639=96% 活细胞不折色，折光性强。死细胞由于染料可渗入细胞内，故死亡细胞染成蓝色，死细胞体积较大，无光泽。 1. 人外周血中的淋巴细胞组成？ 2. 根据细胞的表面标志分离淋巴细胞的原理是什么？ 1.答：血液循环中的淋巴细胞。主要由T细胞(占70%～80%)和B细胞(占20%～30%)组成 2.答：外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同.淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075∽1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离. 姓名： 王亚斌 班级： 生物技术12（1）班 学号： [1**********]26 实验二：_E-玫瑰花环形成实验_ 1.掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。 2.熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。 二、方法步骤、观察内容 1、取肝素抗凝血1~2ml，用分层液分出淋巴细胞并洗涤，用Hanks液调整细胞浓度为2—2.5×106ml。 2、取小试管加入l ml淋巴细胞悬液及1%羊红细胞0.l ml，混匀置37℃水浴箱5分钟。 3、800～1000 r/min低速离心5分钟，放4℃冰箱2小时。 4、轻轻旋转试管使团块混匀，加2滴0.8%戊二醛液，摇匀，室温静置10分钟，使E花环固定。 5、取悬液一滴放于载玻片上，将稀释的瑞氏染液加入玻片上染色3分钟。 6、弃去染液，待干后油镜观察，计数200个淋巴细胞中形成花环的细胞效，算出百分率。 1、淋巴细胞染成深蓝色，羊红细胞染成淡红色。 2、每个淋巴细胞上粘附三个以上羊红细胞者即为玫瑰花环形成细胞。 细胞总数为50个 花环数为18 花环形成率为18/50=36% 1. 形成T淋巴细胞形成玫瑰花环百分率变化的因素有哪些？ 2. 临床上T淋巴细胞数目的变化与哪些疾病的诊断及治疗疗效观察有关系？ 1. 答：T淋巴细胞数量的变化于机体的细胞免疫功能状态有一定关系。人周围血液中T淋 巴细胞表面有羊红细胞受体，与绵羊红细胞相遇时，在其周围形成花环样细胞团，凡能结合三个以上绵羊红细胞者称为E玫瑰花环形成细胞。 2. 答：T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞，它是由骨髓中的一部分多能干细胞或前T细 胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。T细胞分为CD4 T细胞和CD8 T细胞两个主要的亚群，T淋巴细胞及亚群的检测结果可以解释一些疾病发病机理、对患者的免疫功能和预后做出判断以及指导治疗，如感染性疾病、肿瘤性疾病、自身免疫性疾病、器官移植患者、其他免疫缺陷或异常的患者。