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抗核抗体试剂盒说明书 1 抗核抗体试剂盒说明书lbrack;1rsqb; 抗核抗体（ANA ）检测试剂盒（50人份） 间接免疫荧光法检测抗核抗体（Anti-nuclear Antibody，ANA ），用于自身免疫病（Autoimmune Diseases）的筛选检查。 2. 临床意义及检测原理： 抗核抗体是自身抗体中的一组抗体，指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。ANA 靶抗原分布于整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。ANA 阳性的疾病很多，最常见于弥漫性结缔组织病，如系统性红斑狼疮（SLE ）、干燥综合征（SS ）、类风湿关节炎（RA ）、硬皮病（SSc ）等。在某些非结缔组织病和正常老年人也可出现低滴度的阳性。ANA 检测在临床上是一个极重要的筛选试验，ANA 阳性（高滴度）标志了自身免疫性疾病的可能性，ANA 检测对风湿性疾病的诊断和鉴别具有重要意义。 ANA 的检测以HEp-2细胞（人喉癌上皮细胞）作为抗原底物。具有核抗原丰富、特异性 强、核大、细胞结构清晰、易于结果观察及荧光染色核型分析等优点。相对于传统抗原底物（鼠肝、鼠肾）在检测某些抗核抗体时有明显优越性，如抗SSA/Ro抗体、抗着丝点抗体、抗增殖性细胞核抗原（PCNA ）抗体、抗rRNP 抗体、抗线粒体抗体、抗各种细胞器抗体、抗细胞骨架抗体、抗细胞周期蛋白抗体等。 本试剂盒以HEp-2细胞为抗原，采用间接免疫荧光法（Indirect Immunofluorescence IIF） 检测，在与病人待测血清反应后，加入荧光素（FITC ）标记的兔抗人IgG 抗体，最终在荧光显微镜下观察结果。 3. 试剂盒组成： 名称 ? HEp-2抗原片 ANA 阳性对照（均质型，直接使用）规格 数量 5人份/张张 300μl/支 1支 1支 1支 2支 2袋 ANA 荧光二抗（直接使用）/支 1支 ANA 阴性对照（直接使用）μl/支 封片剂（直接使用）支 吐温（Tween-20）支 PBS 粉剂袋 地址：北京市昌平区生命园路29号科研生产大楼B-203 邮编：102206 TEL ：010 FAX ：010 ? 盖玻片片/袋 1袋 4. 标本的采集处理和保存： 待测标本最好是新鲜采集的病人血清或血浆，若当时不检测，可将血清或血浆分离出来， 置2℃～8℃冷藏保存，一周内检测结果仍然可靠。若标本中有微粒可低速离心后取上清检测。 5. 操作步骤： 1) 准备：取出HEp-2抗原片，待其恢复至室温后剪开包装。将洗涤用的PBS 粉剂用蒸馏水溶 解至1L ，加入2ml 吐温，混匀后作洗涤和标本稀释用。 2) 稀释：待测血清用洗涤液作1:100稀释。 3) 加样：在倒扣板的反应孔内分别加入稀释好的血清和阴阳性对照，25μl/孔。注意：加样时 避免产生气泡。 4) 孵育：将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育30min 。注意：确保每个标本均能够与 抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。 5) 洗涤：取出抗原片，用洗涤液轻轻从一侧将反应液冲洗掉，浸泡至洗片缸内，静置5 min后， 再用蒸馏水冲洗1次。 6) 加样：在倒扣板的反应孔内加入ANA 荧光二抗，25μl/孔。注意：加样时避免产生气泡。 7) 孵育：用纸擦去抗原片周边和反面多余液体后，将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵 育30min 。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。 8) 洗涤：重复步骤5) 。 9) 封片：?在盖玻片上滴加封片剂。用纸擦干抗原片周边和反面多余液体后，将载片的抗原基 质朝下置于准备好的盖玻片上，完成封片。 10) 结果观察：荧光显微镜下观察结果。 6. 结果判断： 显微镜下可见HEp-2细胞分布均匀、胞浆丰富、细胞呈多边形伸展。ANA 阴性时整个细 胞无荧光或极弱的均匀荧光。ANA 阳性时因靶抗原在细胞内所处位置的不同而表现不同的荧光染色模型，为接下来特异性较强的抗体检测提供了线索。常见的阳性荧光染色模型有下述6种： 均质型（homogeneous ，H ）：胞核荧光均匀一致，分裂期细胞染色体呈浓集染色。 斑点型（speckled ，S ）：胞核内荧光呈不同粗细程度的斑点或斑块状，核仁有时阳性，分 裂期细胞染色体阴性。 地址：北京市昌平区生命园路29号科研生产大楼B-203