USP35NF3061非无菌制剂的微生物检查微生物计数.pptxVIP

非无菌制剂的微生物检查：微生物计数;总述 计数培养基生长能力测试和方法适用性 产品检验; 检验方法提供了在有氧条件下嗜常温菌和真菌的定量计数方法。 （该方法不适用于含活性微生物作为活性组分的产品） 如供试品具有抗菌活性，尽可能移除或中和。如使用灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。 如使用表面活性剂进行样品制备，应证明其对微生物无毒性及其与所用灭活剂的相容性。 ;计数培养基生长能力测试和方法适用性; 生长能力测试：;总则;名词缩写解释;试验菌株;菌液制备;阴性对照;培养基生长测试;结果判断;计数方法适用性;;水溶性产品：用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，pH7.2磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化培养基将供试品溶解或稀释（一般制备成1:10的稀释液）。必要时，调节pH值至6-8.如需进一步稀释则使用相同的稀释液。 不溶于水的的非脂质产品：用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，pH7.2磷酸盐缓冲液或大豆酪蛋白消化培养基将供试品溶解或稀释（一般制备成1:10的稀释液）。对于润湿性差的物质可加入表面活性剂，如1g/L吐温80助混。必要时，调节pH 值至6-8。如需进一步稀释则使用相同的稀释液。 脂质产品：用无菌十四烷酸异丙酯溶解，或将供试品与最少量并能使供试品乳化的无菌吐温80或其它非抑制性无菌的表面活性剂混合。小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释剂使成1∶10供试液，混合，并在最短时间内形成乳状液。必要时，用含适宜浓度的无菌吐温80或其他非抑制性无菌表面活性剂的稀释剂进一步10倍系列稀释。 ;气雾剂或喷雾剂：在无菌条件下将供试品转移至膜过滤装置或无菌的容器中以便下一步取样。从每个待测容器中取出全部含量或指定剂量的供试品进行检验。 透皮贴剂：去掉透皮贴剂的防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料器皿上。在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布），避免贴膏剂粘贴在一起。然后将其转移至适宜体积并含有灭活剂（如吐温80或卵磷脂）的稀释液的容器中，用力振荡至少30 分钟，制成供试液。;接种与稀释;中和/去除抗菌活性;干扰物质;若没有适宜的方法消除供试品的抑???活性，那么所接种的微生物分离失败可看成是供试品的抗菌活性引起的，同时表明该供试品不能被试验菌污染。 但是，供试品也可能仅对一些特定的微生物具有抑制作用，而对试验菌株之外或试验菌株中代表性较差的其他菌株没有抑制作用。 因此，根据微生物的生长和特定的可接受标准，用最高稀释级别的供试液进行检验。 ;产品存在情况下的微生物恢复生长;薄膜过滤法—所用的滤膜标示孔径不得大于0.45 μm. 选择滤膜的材质应保证其细菌截留的能力不受供试品及其他组分影响。每种微生物使用单独的薄膜过滤器。 按“样品制备”、“接种于稀释”、“中和/去除抗菌活性”项下所述制备样品，然后转移至薄膜过滤器后迅速过滤，并用适宜体积的稀释剂冲洗滤膜。 用于确定TAMC时，将滤膜转移至TSA的表面； 用于确定TYMC时，将滤膜转移至SDA的表面。;平板计数法——每种培养基至少制备两份平板计数，结果以平均值表示。 倾注平板法——先取1mL按“样品制备”、“接种与稀释”和“中和/去除抗菌活性”项下所述制备的样品加入直径为90mm的培养皿，后加入15-20mL温度不超过45℃ TSA或SDA，混匀，凝固，按表1所述培养。如使用更大的培养皿，应相应增加琼脂培养基的用量。每种培养基取其计数的算术平均值，并计算原接种液的cfu值。 表面涂布法——取15-20mL温度不超过45℃TSA或SDA注入直径为90mm的培养皿，凝固，制成平板。如使用更大的培养皿，应相应增加琼脂培养基的用量。干燥培养皿，可用层流柜或培养箱进行干燥。量取不少于0.1mL的按“样品的制备”、“接种与稀释”和“中和/去除抗菌活性”项下所述制备的样品，并将其铺展在培养基的表面。培养和计数方法同倾注平板法。 ;最大概率数法（MPN）——精密度和准确度要低于薄膜过滤法和平板计数法。 MPN法只适用于无其它方法可选时TAMC的计数，本法不适用于霉菌计数。若使用MPN法，按下述程序进行操作。 按“样品制备”、“接种与稀释”和“中和/去除抗菌活性”项下所述，至少制备三份连续稀释10倍的供试液（即3个稀释级别）。从每一稀释级别中取出三等份的1g或1mL供试液接种于三个含9-10mL大豆酪蛋白消化肉汤试管。必要时，往培养基中加入表面活性剂或灭活剂。 于30℃-35℃培养所有试管中的微生物，培养时间不超过3天。如因供试品的性质导致难以读取结果或对结果不确定，再次用相同的肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂在相同的温度下培养1-2天，读取再次培养的结果。根据表2确定每克或每毫升供试品中微生物的最大概率数。;表2;结果与解释;产品检验;检验用量;产品检测;平板计数法 倾注平板法——按照“计