透射电子显微镜.pptxVIP

透射电子显微镜 （Transmission Electron Microscope TEM） TEM具有和光镜相似的结构系统,由电子枪产生的电子射线作为光源 ,由电磁透镜代替光镜中用玻璃制成的聚光镜、物镜和目镜 TEM 镜体结构相当复杂，镜筒内部要求高真空状态;; 第一节 透射电镜结构和工作原理 一、透射电镜结构 二、透射电镜工作原理★ 第二节 透射电镜样品制备技术 一、超薄切片技术★ 二、特殊组织样品制备 ; 第一节 透射电镜的结构和工作原理 照明系统：电子枪、会聚透镜 镜筒{成像系统：样品室、物镜、中间镜、投影镜 观察记录系统：观察室、底片室 真空系统：机械泵、油扩散泵、真空管等 辅助{电源系统：高压电源、透镜电源、调压器等 水冷系统：循环水泵等 ; （一）电子束与电磁透镜 ＆电子束在真空中运动的速度与加速电压有关（阳极）加速电压越高，电子束的波长越短(根据光学阿贝公式原理，一台仪器的成像最高分辨率，约为它使用信息传递媒介波长的一半。电镜之所以能获得很高的成像分辨率，是由于它的电子束波长远较可见光的波长为短） ＆ 电磁透镜的焦距与磁场（线圈组成，当电流通过时产生磁场）强度有关,磁场越强，焦距越短，放大倍率越高; ; 第二节 透射电镜样品制备技术 一、常规样品制备技术 超薄切片技术 ※ 负染技术 二、特殊样品制备技术 电镜酶细胞化学技术 免疫电镜技术 电镜原位杂交技术等 ; 普通光镜切片厚度约5μm左右 — 石蜡切片 透射电镜切片厚度在50nm左右 — 超薄切片 （100nm以下） 目前有关生物体的各种组织、细胞的形态结 构知识大部分是超薄切片技术所提供 ; 取 材 预固定 后固定 脱 水 浸 透 包 埋 修 块 切 片 染 色 ; 快 尽量保持其生活状态，在1分钟内固定 小 1mm3的小块 轻 不要牵拉、锯、挤压组织 冷 4℃保存 ; 1、固定目的 把在活体状态时的结构尽可能 完整保存下来 2、常用固定剂 ⑴ 戊二醛（ glutaraldehyde ） 　　 对糖原、糖蛋白、尤其是微管、内质网 　　 细胞基质有较好的固定作用 ⑵ 四氧化锇( osmium tetroxide,OSO4 ) 对含蛋白质、脂肪性物质有良好的固定作用 特别对磷脂蛋白膜的结构有良好的保存作用 ;⑶ 高锰酸钾 ( potassium permangauate ) 对磷脂蛋白类有特别良好的固定作用 尤其对神经髓脂质的保护更为显著 ⑷ 甲醛（formaldehyde） 对酶活性的保存却优于戊二醛 在电镜细胞化学中常采用;; 指将样品内所含的游离水分完全清除的过程 (常用的脱水剂为乙醇和丙酮) 50%乙醇 10～15分钟 4℃ 70%乙醇 10～15分钟 4℃ 80%乙醇 10～15分钟 4℃ 90%乙醇 10～15分钟 4℃ 100%乙醇 3次，每次10分钟，室温; 经脱水处理的样品，即可用包埋剂进行浸透 浸透 利用包埋剂逐步取代样品中的脱水剂 使细胞内外所有空隙都被包埋剂填充 包埋 浸透好的样品块放入灌满包埋剂的胶 囊或适当的模具中经过紫外线照射或 加温聚合，即可制成包埋块 包埋剂 环氧树脂618 、 Epon812 Lowiscryl K4M低温树酯包埋剂; （半薄切片的意义： 1、选取超薄切片的部位 超薄切片的面积一般要小于0.5mm2，要经过半薄切片选取有意义的部位（对肾脏、胰腺、