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蛋白提取实验步骤:
1、细胞总蛋白提取
A、对于悬浮细胞:离心收集细胞,每106细胞加250ulRIPA(在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂),振荡。如果需要提高蛋白浓度,可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。
B、对于贴壁细胞:
a、用TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。
b、加入适当体积的RIPA(使用前数分内加入蛋白酶抑制剂)于培养板、瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶,使试剂与细胞充分接触。
c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下,收集到1.5ml离心管中。
C、冰浴30min,期间用移液器反复吹打,确保细胞完全裂解。
D、12000g离心5min,
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